一、氧化应激与抗氧化剂在兽医产科上的研究进展（论文文献综述）
马广明[1]（2021）在《辣木叶多糖对奶牛乳腺氧化应激和乳中体细胞数的影响》文中提出奶牛在生产过程中经历了广泛的生理变化与代谢变化,导致活性氧大量堆积,极易诱发氧化应激,从而导致奶牛乳房炎等疾病,造成了较高的治疗成本。因而寻找新型添加剂以缓解奶牛氧化应激并促进奶牛健康养殖已成为行业内学者们研究的热点问题。辣木叶多糖（Moringa leaf polysaccharide,MLP）能够有效清除活性氧并提高机体抗氧化能力,但其是否具有缓解奶牛氧化应激的潜力尚不清楚。因此,本试验以MLP为研究对象,首先通过体外细胞培养试验探究MLP对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）氧化损伤的保护作用,并通过奶牛饲喂试验进一步在体内评估MLP对奶牛泌乳性能、抗氧化能力和血浆免疫的影响,以期为MLP应用于奶牛生产中提供科学依据。此项研究的开展对于缓解奶牛氧化应激具有重要意义。试验一:MLP对BMECs氧化损伤的保护作用本试验首先将BMECs置于含有梯度浓度H2O2的培养基中培养2 h,并检测细胞存活率,以确定建立氧化损伤模型时H2O2的浓度;在细胞培养基中添加不同浓度MLP溶液培养细胞2 h,以筛选MLP的使用剂量;最终得到的结论是H2O2和MLP的作用浓度分别为500μmol/L的4 mg/m L。首先,将BMECs分为4组进行处理,对照组1（BMECs+MLP）、对照组2（BMECs）、损伤组（BMECs+H2O2）和保护组（BMECs+MLP+H2O2）,每组设置8个重复,随后对不同处理组中细胞的活性氧荧光强度、过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量进行检测。结果表明,MLP能够抑制活性氧的生成并显着降低了MDA的含量,同时显着提高了CAT、SOD和GSH-Px的活性（P<0.05）。Hochest33258染色结果与透射电镜观察结果表明,接受MLP保护的细胞结构完整且形态规则。为进一步探究MLP对BMECs的保护作用,本试验通过Western blot与RT-q PCR手段,对细胞中Caspase-3、Bax和Bcl-2的蛋白与m RNA表达进行检测,结果显示,MLP能够显着降低Caspase-3的蛋白与m RNA相对表达水平（P<0.05）,并且通过降低Bax/Bcl-2的值减缓细胞凋亡。试验二:MLP对奶牛泌乳性能、抗氧化能力和血浆免疫的影响本试验采用随机区组试验设计,选取30头体况相近,且处于泌乳高峰期的健康荷斯坦奶牛（体重=618±11.3 kg;泌乳天数=31±3.6 d;产奶量=32.3±1.58 kg;胎次=2）,随机分为3个处理组:（1）基础日粮组（CON）;（2）添加50 g/d MLP处理组（50MLP）;和（3）添加100g/d MLP处理组（100MLP）,经2周适应期后,进行8周饲喂试验。试验结果表明,添加50g/d和100 g/d MLP能够显着提高乳蛋白产量和浓度,而显着降低乳中体细胞数（P<0.05）。此外,添加50 g/d和100 g/d MLP能够显着提高奶牛血浆中总抗氧化能力（Total antioxidant capacity,T-AOC）与SOD活性,显着降低了MDA含量（P<0.05）。在基础日粮中添加50 g/d和100 g/d MLP能够显着增加奶牛血浆中Ig A和Ig M的含量（P<0.05）,提高奶牛免疫力。综上,本研究得出以下结论:（1）MLP能够提高奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,并且通过抑制ROS的产生,保护细胞免受氧化损伤引起的细胞凋亡。（2）MLP能够提高奶牛抗氧化和免疫能力,降低乳中体细胞数,能够降低奶牛乳房炎疾病的发生几率。
常轶聪[2]（2021）在《二氢杨梅素通过调节ROS/NLRP3炎症小体干预LPS诱导鸡肠损伤的机制研究》文中提出脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分之一,大量产生可以诱发肠损伤,并损坏肠道屏障功能,促进LPS的进一步吸收和转移,因此,保证良好的肠道状态是至关重要的。活性氧（Reactive oxygen species,ROS）是各种细胞内广泛存在的高活性小分子,与许多生理或病理过程紧密相关,已被证明与细胞损伤、细胞氧化应激、细胞凋亡等方面有关。ROS还作为一个上游信号参与诱导NLRP3炎症小体的激活进而诱使IL-1β和IL-18成熟和分泌。二氢杨梅素（Dihydromyricetin,DHM）是从藤茶中提取的黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种活性。目前,有关DHM的研究多集中于人和小鼠等哺乳动物,针对于畜禽的研究很少,且关于其保护禽类肠道损伤机制的研究尚未见报道。因此,本课题以雏鸡和鸡原代肠上皮细胞为研究对象,开展DHM对LPS诱导的鸡肠损伤的干预作用研究,探讨了ROS/NLRP3炎症小体参与LPS诱导鸡肠损伤的机制以及DHM通过调节ROS/NLRP3炎症小体来干预LPS诱导鸡肠损伤的机制,为DHM在兽医临床上的研究和应用提供了理论基础和科学依据。试验内容与结果如下:（1）DHM对LPS诱导的鸡肠损伤的干预作用:雏鸡分为六组,即对照组、LPS组、0.025%DHM+LPS组、0.05%DHM+LPS组、0.1%DHM+LPS组和0.1%DHM组。于22日龄时各组腹腔注射60 mg/kg LPS,12 h后采集血液和肠组织检测相关指标。肠组织石蜡切片HE染色结果显示,LPS组肠绒毛破碎严重,可见大量炎性细胞浸润,血管结构模糊,并且在管腔内可见脱落的组织;0.05%和0.1%DHM预防效果较好,黏膜形态结构相对正常,仅有少量炎性细胞浸润。肠组织扫描电镜观察结果显示,LPS组肠绒毛破损严重,表面粗糙不平,结构混乱,无正常指状形态;0.05%和0.1%DHM预防后肠绒毛结构基本恢复正常,仅有少量破损;与对照组相比,LPS组血浆和肠组织DAO活性、肠组织ROS类物质（H2O2和NO）和氧化应激指标（MDA、T-SOD、GSH和GSH-Px）、紧密连接蛋白（ZO-1、occludin和claudin-1）、细胞凋亡相关因子（bcl-2、bax和caspase-3）、炎症反应相关因子（TLR4、p-p65/p65、IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10）以及NLRP3炎症小体相关因子（NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18）均发生极显着变化（p<0.01）。与LPS组相比,0.05%和0.1%DHM能够极显着降低血浆DAO活性和肠组织H2O2、NO和MDA含量（p<0.01）,极显着升高肠组织GSH含量、T-SOD和GSH-Px活性来干预肠黏膜损伤和氧化应激（p<0.01）;DHM能够极显着升高ZO-1、occludin和claudin-1的蛋白表达来维持肠组织屏障功能（p<0.01）;DHM能够极显着升高bcl-2的表达（p<0.01）,并极显着降低bax和caspase-3的表达而抑制LPS引起的细胞凋亡（p<0.01）;DHM还可以极显着降低肠组织TLR4蛋白表达、NF-κB p65的活化、IL-6、IL-8和TNF-αm RNA的表达（p<0.01）,同时极显着升高IL-10 m RNA表达而发挥抗炎作用（p<0.01）;重要的是,DHM能够通过极显着降低肠组织NLRP3和caspase-1 m RNA和蛋白的表达进而极显着抑制IL-1β和IL-18 m RNA表达和含量（p<0.01）。（2）LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤模型的建立:应用I型胶原酶消化14日龄SPF鸡胚肠组织分离原代肠上皮细胞,利用贴壁时间差异法去除成纤维细胞得到纯化的肠上皮细胞,并使用免疫荧光法进行鉴定。结果显示,分离的肠上皮细胞由完整的小肠隐窝团细胞和少量单个细胞构成,细胞呈扁平多角状或椭圆状,细胞边界清楚,互相不重叠。培养24-48 h后肠上皮细胞可以贴壁并单层平铺在细胞培养瓶或培养板上。应用不同浓度LPS（60、80、100、120、150μg/m L）分别作用细胞8、10和12 h,通过MTT法检测细胞活力确定LPS的最适作用浓度和时间。结果表明,不同浓度LPS作用细胞后,细胞活力呈剂量和时间依赖性降低。综合考虑LPS作用浓度和时间,本研究最终以100μg/m L LPS作用12 h,成功诱导LPS致鸡原代肠上皮细胞损伤模型。（3）ROS/NLRP3炎症小体参与LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤机制研究:NAC是一种广谱ROS抑制剂,本试验首先使用1.25、2.5和5 mmol/L NAC干预LPS诱导的肠上皮细胞损伤,检测细胞活力确定NAC的最适作用浓度为2.5 mmol/L。然后,将细胞分为四组,即对照组、LPS组、NAC+LPS组和NAC组。NAC预处理2 h后,给予LPS作用12 h,收集上清液和细胞。结果显示,与LPS组相比,NAC极显着降低了ROS含量（p<0.01）;抑制ROS能够极显着降低MDA含量（p<0.01）,极显着增加GSH含量、T-SOD和GSH-Px活性（p<0.01）;抑制ROS还通过极显着增加ZO-1、occludin和claudin-1的蛋白表达来维持肠上皮细胞屏障功能的完整性（p<0.01）;而且,抑制ROS后减少了细胞凋亡,极显着升高bcl-2的表达（p<0.01）,极显着降低bax和caspase-3的表达和活化（p<0.01）;ROS的抑制能够极显着降低IL-6、IL-8和TNF-αm RNA表达（p<0.01）,并进一步增加IL-10 m RNA的表达（p<0.01）;重要的是,抑制ROS极显着降低NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 m RNA的表达（p<0.01）,极显着降低NLRP3和caspase-1的表达和活化（p<0.01）,并极显着减少细胞IL-1β和IL-18的分泌以及LDH的释放（p<0.01）。为了进一步确定LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤中ROS的生成是否通过调节NLRP3炎症小体的活化而引起IL-1β和IL-18的分泌,本试验应用NLRP3特异性抑制剂MCC950对其进行干预。将细胞分为四组,即对照组、LPS组、MCC950（10μmol/L）+LPS组和MCC950（10μmol/L）组。MCC950预处理2 h后,给予LPS作用12 h,收集上清液和细胞。结果表明,与LPS组相比,MCC950能极显着降低NLRP3和caspase-1 m RNA的表达（p<0.01）,极显着抑制NLRP3和caspase-1的蛋白表达和活化（p<0.01）,但对IL-1β和IL-18 m RNA表达无明显影响。而且,抑制NLRP3炎症小体的活化极显着降低了细胞IL-1β和IL-18的分泌以及LDH的释放（p<0.01）。以上结果表明,ROS/NLRP3炎症小体参与了LPS诱导的鸡原代肠上皮细胞损伤。（4）DHM通过调节ROS/NLRP3炎症小体干预鸡原代肠上皮细胞损伤机制研究:本试验使用不同浓度（10、20、40、80、160、320、640μmol/L）DHM作用肠上皮细胞,检测细胞活力筛选DHM的安全浓度范围和作用浓度。将细胞分为六组,即对照组、LPS组、DHM（10μmol/L）+LPS组、DHM（20μmol/L）+LPS组、DHM（40μmol/L）+LPS组和DHM（40μmol/L）组。DHM预处理2 h后,给予LPS作用12 h,收集上清液和细胞。经筛选,40-640μmol/L DHM能够极显着升高肠上皮细胞的活力（p<0.01）,表明在此浓度范围内DHM无明显细胞毒性。与LPS组相比,20-320μmol/L DHM干预后能极显着恢复细胞活力（p<0.01）。因此,10、20和40μmol/L DHM被用于后续试验。结果显示,DHM能干预肠上皮细胞氧化应激,极显着降低MDA含量（p<0.01）,极显着升高GSH含量、T-SOD和GSH-Px活性（p<0.01）;DHM能极显着升高ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达而维持肠上皮细胞屏障功能（p<0.01）;DHM还极显着升高bcl-2的表达（p<0.01）,极显着降低bax和caspase-3的表达和活化（p<0.01）,对细胞凋亡具有明显的抑制作用;而且,DHM能极显着抑制TLR4蛋白表达、NF-κB p65的活化以及IL-6、IL-8和TNF-αm RNA表达,并进一步地增加了IL-10 m RNA的表达而发挥抗炎作用（p<0.01）。为了研究DHM是否通过调节ROS/NLRP3炎症小体而起作用,本试验又检测了各组细胞ROS含量,结果显示,DHM能够极显着降低ROS的生成（p<0.01）,进一步极显着降低NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 m RNA的表达（p<0.01）,极显着抑制NLRP3和caspase-1的蛋白表达和活化（p<0.01）,最终极显着抑制细胞IL-1β和IL-18的分泌以及LDH的释放（p<0.01）。以上结果表明,DHM可通过调节ROS/NLRP3炎症小体而起到干预LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤的作用。综上所述,DHM能够减轻LPS引起的鸡肠损伤、氧化应激和细胞凋亡,维持肠上皮屏障功能,并抑制炎症反应和NLRP3炎症小体的活化。通过分离、纯化和鉴定获得鸡原代肠上皮细胞,并以100μg/m L LPS作用12 h成功诱导肠上皮细胞损伤模型。ROS的抑制能够缓解LPS诱导的肠上皮细胞损伤、氧化应激和细胞凋亡;ROS的清除能抑制炎症反应并通过抑制NLRP3炎症小体的活化进而降低IL-1β和IL-18的释放和肠上皮细胞的膜通透性。DHM能够促进肠上皮细胞的增殖,干预LPS引起的细胞损伤、氧化应激、细胞凋亡和炎症反应;DHM还能够维持肠上皮细胞的屏障功能;重要的是,DHM能够通过抑制ROS的生成,进而抑制NLRP3炎症小体的活化,这最终降低了IL-1β和IL-18的释放及细胞膜通透性。因此,DHM可通过调节ROS/NLRP3炎症小体来缓解LPS引起的鸡肠损伤和原代肠上皮细胞损伤。
万浩宏[3]（2021）在《富硒酵母提取物对小鼠乳腺肿瘤细胞生长抑制作用及肿瘤细胞硒蛋白mRNA表达调控的研究》文中认为酵母硒经机体摄入后可转换成以硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸为代表的有机活性形式,发挥辅助抗癌作用。商品化酵母硒的有机硒含量并不稳定,且对其活性形式参与抗癌的作用研究结果并不一致。本试验拟通过优化牦牛源酿酒酵母的富硒条件,获得高硒含量的富硒酵母,利用“蜗牛酶酶解+超声破碎法”得到富硒酵母破碎提取物（SEYE-5668）并检测其硒含量。通过细胞试验和动物模型试验研究富硒酵母对小鼠乳腺肿瘤的生长抑制作用及组织细胞硒蛋白m RNA的表达调控作用。本次研究取得了以下结果。1.将SWUN5668株酿酒酵母的硒含量提升至2781μg/g。运用蜗牛酶酶解联合超声破碎,提升酵母细胞的破碎率至97.62±2.33%,酿酒酵母和富硒酵母的蛋白提取效率分别达到了8.70%和8.35%（P>0.05）,富硒酵母破碎提取物（SEYE-5668）的硒含量最高达到3100ng/m L。2.不同类型的小鼠乳腺肿瘤细胞株（4T1,EMT6和67NR）对不同含硒化合物的敏感性存在差别,本研究所得的SEYE-5668对3株肿瘤细胞株的抑制作用显着强于其它含硒化合物（亚硒酸钠、L-SeC、L-SeM）（P<0.01）,且在硒浓度为0.01μmol/L时的抑制作用最强,而酿酒酵母破碎提取物无体外抑制作用。3.SEYE-5668对硒蛋白组m RNA的表达调控作用呈现时间剂量依赖性。4.体内实验表明,不同硒源化合物在超剂量（80倍日常需求量）使用时均可抑制小鼠乳腺肿瘤（4T1模型）生长的作用。对比结果显示,SEYE-5668的抑制肿瘤生长、转移的作用最明显,且对肝脏和肺脏组织产生的副作用最小。本次试验首次在体外细胞实验中表现,富硒酵母破碎提取物对乳腺肿瘤硒蛋白组m RNA的表达调控具有时间剂量依赖性。并且富硒酵母及其破碎提取物在体内外试验中都表现出了优于亚硒酸钠和其他几种有机硒的肿瘤抑制作用和更小的毒副作用。SEYE-5668在治疗和预防肿瘤疾病方面具有一定的应用价值。
纪敏[4]（2020）在《迷迭香酸对顺铂致小鼠急性肝肾损伤的保护作用及其机制研究》文中研究说明目的:近年来,由于药物不合理使用引起的药物性肝肾损伤严重危害人类和动物健康,因此需要寻求能缓解药物性肝肾损伤的天然低毒药物。本研究旨在探究迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）对顺铂（Cisplatin,CP）所致的小鼠急性肝肾损伤的保护作用及其作用机制,为开发RA作为临床上缓解药物性肝肾损伤药物提供药效学理论依据。方法:（1）建立小鼠急性肝肾损伤病理模型:将20只雄性BALB/c小鼠随机分4组,即Control组、CP（10、20、40 mg/kg）模型组,每组5只。CP模型组一次性单剂量i.p.CP（10、20、40 mg/kg.BW）诱导小鼠急性肝肾损伤,Control组i.p.等剂量0.9%Na Cl溶液。72 h后,取血,检测血清ALT、AST、BUN、CRE含量;取肝脏、肾脏、脾脏,计算脏器系数,并制作肝脏、肾脏组织病理切片。（2）RA对CP致小鼠急性肝肾损伤的保护作用:将42只雄性BALB/c小鼠随机分7组,即Control组、CP模型组、RA（20 mg/kg）对照组、RA（5、10、20 mg/kg）预处理组、地塞米松（Dex）（4 mg/kg）预处理组,每组6只。RA和Dex预处理组连续7 d i.p.RA（5、10、20 mg/kg.BW）或Dex（4 mg/kg.BW）,Control组和CP模型组i.p.等剂量0.9%Na Cl溶液。试验第5 d,除Control组和RA对照组外,其余组别i.p.20 mg/kg.BW的CP诱导小鼠急性肝肾损伤。72 h后,取血,检测血清ALT、AST、BUN、CRE、IL-1β、IL-6、TNF-α含量;取肝脏、肾脏和脾脏,计算脏器系数,并制作肝脏、肾脏组织病理切片;采用q RT-PCR法检测肝、肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平。（3）RA对CP致小鼠急性肝肾损伤的作用机制研究:在（2）的试验基础上,取肝脏、肾脏,检测肝、肾组织SOD、CAT活性和GSH、T-AOC、MDA、NO、MPO水平,并采用q RT-PCR法检测肝、肾组织SOD、CAT、GPx、Nrf2、Keap1、HO-1、GCLC、GCLM的m RNA表达水平。结果:（1）与Control组相比,各CP模型组小鼠逐渐出现精神萎靡、被毛凌乱、活动迟缓、排尿量减少等临床症状;血清BUN、CRE、ALT、AST含量升高;肝组织可见局部肝细胞轻微空泡变性,肾组织结构排列紊乱,肾近端小管退行性改变,如刷状缘明显消失、胞质空泡等,肾小管上皮细胞脱落、坏死等。综合小鼠临床症状、肝肾功能血清生化指标与组织病理学结果,最终确定以20 mg/kg.BW的CP建立小鼠急性肝肾损伤病理模型。（2）与Control组相比,CP模型组小鼠出现精神萎靡、被毛凌乱、活动迟缓、埋头蜷缩等临床症状;肝组织可见局部肝细胞轻微空泡变性,肾组织结构排列紊乱,肾近端小管退行性改变,刷状缘消失,胞浆染色变淡,胞核固缩、碎裂或溶解,肾小管上皮细胞变性或坏死;血清BUN、CRE、ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α含量及肝、肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达水平升高。而RA预处理能缓解小鼠临床症状,减少肝肾组织损伤,降低血清BUN、CRE、ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α含量,并抑制肝、肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达。（3）与Control组相比,CP模型组小鼠的肝、肾组织MPO、MDA、NO水平升高,SOD、CAT活性和GSH、T-AOC水平及SOD、CAT、GPx、Nrf2、Keap1、HO-1、GCLC、GCLM的m RNA表达水平下降。RA预处理能显着降低肝、肾组织MPO、MDA、NO水平,增强肝、肾组织的总抗氧化能力,并激活Nrf2信号通路上调Nrf2信号通路下游相关靶基因的m RNA表达。结论:一次性单剂量i.p.20 mg/kg.BW的CP可成功建立小鼠急性肝肾损伤病理模型;RA能减轻CP诱导的小鼠急性肝肾损伤,可能的作用机制是激活Nrf2信号通路抑制炎症反应,减少氧化应激损伤,并增强肝肾组织的总抗氧化能力。
郝蓓莉[5]（2020）在《二氢杨梅素对内毒素诱导鸡肝损伤的保护作用研究》文中研究说明内毒素,也被称作脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,是革兰氏阴性菌细胞壁特有的组成成分,也是其致病的主要因素。内毒素通过肝门静脉系统进入肝脏,被枯否氏细胞吞噬,当进入肝脏的内毒素过多时,肝脏会发生损伤。肝脏是机体最重要的解毒器官,鸡的肝损伤是家禽养殖中的主要问题之一,给养禽业造成了重大经济损失。二氢杨梅素（Dihydromyricetin,DHM）作为一种类黄酮化合物,具有多种药理活性,包括抗炎、抗氧化、肝脏保护和脂质调节等,在畜牧业发展中拥有广阔的应用前景。本试验以鸡原代肝细胞和海兰白雏鸡为研究对象,研究DHM对LPS诱导鸡肝损伤的保护作用,为DHM在兽医临床上的广泛应用提供理论基础和科学依据。本研究首先通过分离培养获得鸡原代肝细胞,将其分为6组,即对照组、模型组(LPS浓度为40μg·m L-1)、DHM组（20、40、80μM DHM）和DHM对照组（80μM DHM）。原代肝细胞融合率达80%时,DHM组和DHM对照组细胞给予相应浓度的DHM孵育2 h,模型组和DHM组给予40μg·m L-1 LPS,12 h后收集细胞和细胞上清液,应用试剂盒检测上清液中ALT、AST和LDH活性变化及细胞抗氧化指标（T-AOC、CAT、NO、LPO）的水平,RT-PCR法检测细胞中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-12、i NOS）m RNA的表达。将7日龄雏鸡分为6组,即对照组、模型组(LPS剂量为60 mg·kg-1)、DHM组（0.025%、0.05%、0.1%DHM）和DHM对照组（0.1%DHM）。DHM组和DHM对照组雏鸡饲喂添加相应剂量DHM的饲料,对照组和模型组饲喂正常饲料,连续饲喂14 d。模型组和DHM组腹腔注射LPS,对照组和DHM对照组腹腔注射等量的生理盐水,12 h后收集血液和肝脏组织,检测血清中ALT、AST和LDH的活性及肝脏中氧化指标（T-AOC、CAT、NO、LPO）的水平,RT-PCR法检测雏鸡肝脏中炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-12、i NOS）m RNA的表达,并制作石蜡切片,对肝脏进行病理组织学检查。试验结果如下:（1）DHM对LPS诱导鸡原代肝细胞损伤的保护作用:给予LPS 12 h后,与对照组相比,40、60、80、100μg·m L-1组LDH的活性均极显着升高（P<0.01）,因此选用40μg·m L-1 LPS应用于后续的细胞试验。MTT试验结果表明,用不同浓度的DHM处理鸡原代肝细胞12 h后,80、160、320、640、1280μM的DHM组,细胞活性极显着上升（P<0.01）,不同浓度二氢杨梅素处理细胞24 h和48 h后,1280μM的DHM组细胞活力极显着升高（P<0.01）,以上结果表明二氢杨梅素对鸡原代肝细胞没有细胞毒性。与对照组相比,模型组细胞上清液中AST、ALT和LDH的活性极显着升高（P<0.01）;与模型组相比,40μM DHM组细胞上清液中AST、ALT和LDH的活性极显着降低（P<0.01）,结果说明40μM DHM减轻了LPS造成的肝细胞损伤。与对照组相比,模型组细胞中CAT的活性及T-AOC的水平极显着降低（P<0.01）,LPO与NO的含量极显着升高（P<0.01）;相比于模型组,40μM DHM组CAT的活性和T-AOC的水平极显着升高（P<0.01）;40μM DHM组NO和LPO的含量极显着降低（P<0.01）,结果证明40μM DHM可以明显提高细胞的抗氧化能力。与对照组相比,模型组细胞中TNF-α,IL-6,IL-12和i NOS m RNA的表达均极显着升高（P<0.01）;相比于模型组,40μM DHM组TNF-α、IL-6、IL-12和i NOS m RNA的表达均极显着降低（P<0.01）,结果表明40μM和80μM DHM可以通过调节炎症因子的表达来提高细胞的抗炎能力。（2）DHM对LPS诱导雏鸡肝损伤的保护作用:腹腔注射LPS剂量60 mg·kg-1后,雏鸡血清中ALT、AST和LDH活性极显着升高（P<0.01）,因此选用该剂量的LPS用于内毒素诱导雏鸡肝损伤模型的复制。与对照组相比,腹腔注射LPS后雏鸡血清中AST、ALT和LDH的活性极显着升高（P<0.01）;0.05%DHM组雏鸡血清中ALT、AST和LDH的活性极显着降低（P<0.01）,结果表明0.05%DHM降低了血清中转氨酶和乳酸脱氢酶的活性,减轻LPS所致的雏鸡肝损伤。与对照组相比,模型组CAT的活性和T-AOC的水平极显着降低（P<0.01）,LPO和NO的含量极显着升高（P<0.01）;与模型组相比,0.05%DHM组肝脏中CAT的活性和T-AOC的水平极显着升高（P<0.01）,LPO和NO的含量极显着降低（P<0.01）,说明DHM可以通过提高肝脏中抗氧化酶的活性,减少过氧化产物的含量来提高雏鸡抗氧化能力。与对照组相比,模型组TNF-α、IL-6、IL-12和i NOS的m RNA表达均极显着升高（P<0.01）;与模型组相比,0.05%DHM组TNF-α、IL-6、IL-12和i NOS的m RNA均极显着降低（P<0.01）,结果表明0.05%DHM可以降低LPS所致的炎症因子的升高,说明二氢杨梅素对肝脏中的炎症因子的表达有调节作用。病理组织学结果显示对照组肝脏结构完整,肝小叶结构清晰,细胞形态正常;模型组肝脏组织中肝索结构紊乱,细胞肿胀,肝索间隙变大并且有炎性细胞浸润;相比于模型组,0.025%DHM组肝细胞肿胀程度减小,炎性细胞浸润;给予0.05%和0.1%DHM后,雏鸡肝脏中肝小叶结构趋于正常,炎性细胞浸润减少,DHM减轻了LPS所致的雏鸡肝损伤。本研究成功复制了LPS所致的鸡原代肝细胞损伤模型和雏鸡肝损伤模型,明确DHM可以通过调节肝细胞和肝脏中IL-6、TNF-α、IL-12和i NOS m RNA的表达,增强T-AOC、CAT的水平,降低NO和LPO的含量,增强肝细胞和肝脏的抗氧化能力和抗炎能力,减轻LPS诱导的肝细胞损伤和雏鸡肝损伤。因此,二氢杨梅素可以通过调节抗氧化能力和抗炎能力来干预LPS诱导的鸡肝损伤。
谭斅[6]（2020）在《木犀草素对鹌鹑机体影响及其缓解无机汞致肝肾损伤作用》文中研究表明汞（Mercury,Hg）是一种普遍存在于环境中的有毒物质,随着城市化和工业化进程的加速进行以及环境污染的加剧,Hg污染的现象日趋严重。过量的Hg可通过空气、饮水和食品蓄积在畜禽的机体内,严重威胁着畜禽健康与动物源性食品安全。木犀草素（Luteolin,Lut）的化学名称为3’,4’,5,7-四羟基黄酮,它广泛存在于蔬菜、水果和中草药等天然植物中,具有低毒、无诱变性、抗氧化和抗炎等多种生物学作用在畜牧业发展中拥有广阔的应用前景。本试验以鹌鹑为研究对象,在鹌鹑饲料中添加不同剂量的Lut,研究其对鹌鹑生长性能和肝肾功能的影响;以及通过建立鹌鹑氯化汞（Mercuric chloride,Hg Cl2）中毒模型,研究Lut对Hg Cl2引起的鹌鹑肝肾损伤的缓解作用,为Lut在兽医临床上的广泛应用,无机Hg中毒的防治措施以及保障动物源性食品安全提供理论基础和科学依据。试验内容如下:（1）Lut对鹌鹑生长性能和肝肾功能的影响:21日龄雄性鹌鹑随机分为4组,分别为空白对照组、Lut低剂量组（200 mg/kg）、Lut中剂量组（400 mg/kg）和Lut高剂量组（800 mg/kg）,每组10只,连续饲喂21 d。每周称量鹌鹑空腹体重和采食量,计算平均日增重（Average daily gain,ADG）和平均料重比（Feed gain ratio,F/G）。最后一次称重后,采血测定红细胞（Red blood cell,RBC）,白细胞（White blood cell,WBC）和血红蛋白（Hemoglobin,Hb）水平。剖取肝脏和肾脏进行称重,计算脏器指数。检测血清总蛋白（Total protein,TP）、白蛋白（Albumin,ALB）、总胆固醇（Total cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、肌酐（Creatinine,CREA）和尿酸（Uric acid,UA）的含量以及谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）和谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）的活性。采用试剂盒检测肝脏和肾脏匀浆中丙二醛（Malondialdehyde,MDA）和谷胱甘肽（Glutathione,GSH）含量以及超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性。结果表明:鹌鹑体重、ADG、TP、ALB、肝肾的GSH含量和SOD活性随着Lut添加剂量的升高而升高,但与空白对照组相比均无显着差异;而F/G、TC、TG、CREA、UA和肝肾的MDA含量以及ALT和AST的活性随着Lut添加剂量的降低而降低,但与空白对照组相比均无显着差异（p>0.05）。各个试验组的血液中RBC、Hb和WBC水平以及肝脏和肾脏的脏器指数与空白对照组相比无明显变化趋势,并且无显着差异（p>0.05）。（2）Hg Cl2诱导鹌鹑肝肾损伤模型的建立:21日龄雄性鹌鹑随机分为4组,分别为空白对照组（生理盐水）、Hg低剂量组（2 mg/kg）、Hg中剂量组（4 mg/kg）和Hg高剂量组（8 mg/kg）,每组10只,连续灌胃84 d。每周称量鹌鹑空腹体重和采食量,最后一次称重后,采血测定RBC,WBC和Hb水平。剖取肝脏和肾脏进行称重,计算脏器指数。检测AST和ALT活性以及CREA和UA含量。采用试剂盒检测肝脏和肾脏匀浆中MDA和GSH含量以及SOD活性。肝脏和肾脏的另一部分组织用于制作石蜡切片,观察肝肾组织形态。结果表明:鹌鹑体重增加量、采食量、RBC和Hb水平、肝肾GSH含量、肝肾SOD活性随着Hg Cl2剂量的升高而降低,Hg中剂量组和Hg高剂量组的上述指标与空白对照组相比均显着降低（p<0.05）。而WBC水平、CREA、UA、肝肾MDA含量,肝脏和肾脏指数以及AST和ALT活性随着Hg Cl2剂量的升高而升高,Hg中剂量组和Hg高剂量组的WBC水平、CREA、UA、肝肾MDA含量以及AST和ALT活性与空白对照组相比均显着升高（p<0.05）,Hg高剂量组的肝脏和肾脏指数与空白对照组相比均显着升高（p<0.05）。结合组织病理学观察表明Hg Cl2可呈剂量依赖性诱导鹌鹑肝肾损伤。（3）Lut对Hg Cl2致鹌鹑生长性能降低和肝肾损伤的作用:21日龄雄性鹌鹑随机分为4组,分别为空白对照组（生理盐水）、Lut组（800 mg/kg Lut）、Hg组（6 mg/kg Hg Cl2）和Hg+Lut组（6 mg/kg Hg Cl2+800 mg/kg Lut）,试验周期为84 d。每周称量鹌鹑空腹体重和采食量,最后一次称重后,采血测定RBC,WBC和Hb水平。剖取肝脏和肾脏进行称重,计算脏器指数。检测AST和ALT活性以及CREA和UA含量。试剂盒检测肝脏和肾脏匀浆中MDA和GSH含量以及SOD活性。肝脏和肾脏的一部分组织用于制作石蜡切片,观察肝肾组织形态。运用q PCR法检测肝脏和肾脏中蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）、核因子E2相关因子2（Nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2）、血红素氧合酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）、醌氧化还原酶1（NAD（P）H:quinone oxidoreductase l,NQO1）、多药耐药相关蛋白2（Multidrug resistance-associated protein 2,Mrp2）、重组人B细胞淋巴瘤因子2 xl（B-cell lymphoma-extra large,Bcl-xl）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、p53、转录因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）和白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）的m RNA水平。Western blot检测Akt、Nrf2、NF-κB和TNF-α蛋白水平的表达。结果表明:Hg+Lut组与Hg组相比,体重增加量、采食量、RBC和Hb水平、肝肾GSH含量、肝肾SOD活性均显着性升高（p<0.05）,而WBC水平、CREA、UA、肝肾MDA和Hg含量以及AST和ALT活性均显着性降低（p<0.05）,结合组织病理学观察表明Lut可以缓解Hg Cl2诱导鹌鹑肝肾损伤。q PCR和western blot的结果显示,Hg+Lut组与Hg组相比肝肾氧化应激相关m RNA（Akt、Nrf2、HO-1和NQO1）,细胞凋亡相关m RNA（Bcl-xl）,Mrp2 m RNA表达水平以及氧化应激相关蛋白（Akt和Nrf2）表达水平均显着升高（p<0.05）;而肝肾炎症相关m RNA（NF-κB、TNF-α、IL-6和IL-1β）,细胞凋亡相关m RNA（Bax和p53）的表达水平以及炎症相关蛋白（NF-κB和TNF-α）表达水平均显着降低（p<0.05）。综上所述,Lut对鹌鹑生长性能和肝肾功能无负面影响并且对机体无毒副作用。Hg Cl2可引起鹌鹑体重和采食量下降,诱发鹌鹑发生肝脏和肾脏损伤。Lut可以改善Hg Cl2引起的鹌鹑生长性能的降低;并且通过减轻Hg Cl2引起的氧化应激,进而减轻其细胞凋亡和炎症反应以及促进Hg2+在肝肾的排出,缓解Hg Cl2诱导的肝脏和肾脏损伤。
杜红旭[7]（2019）在《抗鸭Ⅰ型病毒性肝炎中药成分方“田地饮”组方的研制及其抗氧化损伤机制研究》文中进行了进一步梳理1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1）引起的鸭病毒性肝炎（Duck virus hepatitis,DVH）是一种主要危害3周龄以内雏鸭的急性、烈性传染病。由于现阶段兽医临床上除卵黄抗体以外没有针对该病的治疗药物,因此,雏鸭一旦发病将会很快死亡,给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。中药方剂在我国已经有上千年的使用历史,直到现在它仍一直为我国的人畜健康提供着重要保障。中兽医理论认为DVH的病机在于肝经邪热生风,证型为高热生风证,治宜清热凉血、养阴止痉。因此,本研究选用了田基黄、荔枝草、生地黄三味中药材作为组方药材;其中,田基黄,性凉、味甘、微苦,具有清热利湿、散瘀止痛、消肿解毒等功效;荔枝草,性凉、味苦辛,具有清热、解毒、凉血、止血、利尿等功效;生地黄,性凉、味甘苦,具有清热凉血、养阴生津等功效。三者配伍使用从而发挥清肝热、凉血止血、解痉止痛的功效。同时,为了研究方便和质量控制,选用3味中药材的主要活性成分（田基黄黄酮、荔枝草黄酮和生地多糖）组成黄酮-多糖成分方“田地饮”（Hypericum japonicum flavones-Radix Rehmanniae Recens polysaccharides-Salvia plebeia flavones,HRS）进行研究。通过比较单味成分和方剂的体内外抗DHAV-1活性的差异,确定了方剂组方的合理性和有效性。接着,通过体内试验临床研究确认了 HRS对DVH治疗的有效性,并发现其治疗作用的发挥可能是基于其保肝活性和抗DHAV-1增殖活性。为了探究其抗DHAV-1增殖活性机制,研究了 HRS对DHAV-1在鸭胚肝细胞（duck embryonic hepatocytes,DEHs）上增殖各个环节的影响。同时以氧化损伤这一 DVH发病过程中重要的肝损伤机制为切入点,探究HRS的体内外抗氧化活性,随后基于Nrf2/ARE这一抗氧化调控信号通路,研究了 HRS的抗氧化损伤分子调控机制。具体分为以下七部分:试验Ⅰ:抗鸭Ⅰ型病毒性肝炎中药成分方“田地饮”组方的研制 为研制一种临床效果可靠的DVH治疗药物,通过中兽医理论对DVH的辨证,选用了田基黄黄酮（Hypericum japonicum flavones,HJF）、生地黄多糖（Radix Rehmanniae Recens polysaccharides,RRP）、荔枝草黄酮（Salvia plevbeia flavones,SPF）三味中药材活性成分作为组方成分,组成HRS组方。首先通过体外试验,采用MTT法检测了 HJF、RRRP、SPF和HRS在DEHs上的安全浓度以及其对DHAV-1感染的DEHs的保护效力。随后以人工攻毒的方法建立了雏鸭感染DHAV-1的DVH模型,各药物均以3 mg/只.d的剂量通过饮水给药方式对DVH患鸭予以治疗,连续5 d,对比了 3味中药活性成分及其组方对DHAV-1感染雏鸭的病程以及最终死亡率的影响。为了进一步更系统地评估HRS对DVH的临床治疗效果,再次通过建立人工感染DHAV-1雏鸭的DVH模型,并以3 mg/只.d的HRS剂量通过饮水给药方式对DVH患鸭予以治疗,连续5 d,观测雏鸭病死率、肝脏大体眼观病理变化、肝组织显微病理变化、肝功能生化评价指标以及血液中DHAV-1病毒基因表达量的变化。结果:HJF、RRRP、SPF以及HRS在DEHs上的最大安全浓度分别为 12.5 μg/mL、1250 μg/mL、2000 μg/mL、2500 μg/mL;HJF、RRRP、SPF和HRS对DHAV-1感染的DEHs均有一定的保护效力,其最大肝细胞保护率分别为37.0%、9.9%、14.0%、64.3%。在体试验中,3味中药有效成分及其方剂均可以有效缩短DVH病程,HJF、RRRP、SPF以及HRS组的雏鸭死亡率分别为:57.1%、62.9%、60.0%、42.9%。表明通过配伍组合,中药黄酮-多糖成分方剂HRS在体外对肝细胞保护效力较单味组分显着提高;同时对鸭病毒性肝炎的治疗效果也明显优于其单味组分药物。更系统性的体内试验,发现HRS治疗可以显着降低DVH患鸭的高死亡率,同时肝组织眼观病理损伤程度显着减轻,肝组织炎性细胞浸润和坏死面积减小,血浆ALT和LDH含量显着降低,血浆AST和ALB水平明显回调,患鸭血液中DHAV-1病毒基因的表达量显着降低。表明HRS对DVH的治疗效果确切,可能是基于其保肝活性和抗DHAV-1增殖活性。试验Ⅱ:HRS对DHAV-1在DEHs上增殖过程的影响 本试验旨在探究HRS对DHAV-1在DEHs上进行吸附、复制和释放的影响。通过先加毒后加药和先加药后加毒两种不同的加药方式,采用qRT-PCR法检测了 HRS对DHAV-1吸附DEHs的影响,同时采用qRT-PCR法检测了 HRS对DHAV-1在DEHs中的复制和释放的影响。结果:在吸附环节,当先加毒后加药时,HRS组DHAV-1基因表达量和VC组处于同一水平;当以先加药后加毒时,高浓度HRS组DHAV-1基因表达量显着低于VC组;在病毒复制环节,高中低各浓度的HRS组DHAV-1基因表达量均显着低于VC组;在病毒释放环节,HRS组DHAV-1基因表达量和VC组没有差异。表明:HRS抗DHAV-1感染DEHs的作用主要是靠其抑制病毒的复制环节实现的,而药物对病毒吸附的抑制作用只有在高浓度作用下并且以先加药后加毒的情况下才能发挥。试验Ⅲ:HRS的体外抗氧化活性作用研究 本试验旨在探究HRS的自由基清除活性,以及对DHAV-1感染所致DEHs氧化损伤的影响。首先,通过自由基清除试验,检测了 HRS在体外清除ABTS自由基、DPPH自由基以及过氧化氢的能力,然后探究了HRS对DHAV-1感染的DEHs中抗氧化酶SOD、CAT和GPX的抗氧化酶活性以及MDA含量的影响;同时分别通过流式细胞术和免疫荧光法检测了 HRS对DHAV-1感染的DEHs中的ROS含量的影响。结果:HRS在一定浓度范围内具有较好的清除ABTS自由基、DPPH自由基以及过氧化氢的能力;同时可显着提升由DHAV-1感染所引起的DEHs内的SOD、CAT和GPX的抗氧化酶活性的下降,并显着地降低细胞内的MDA和ROS水平。表明:HRS在体外具有良好的抗氧化活性,可显着地改善由DHAV-1感染所引起的DEHs氧化损伤。试验Ⅳ:HRS抗DHAV-1感染雏鸭氧化损伤的作用研究 为探究HRS对DHAV-1感染所引起雏鸭氧化损伤的影响,首先对雏鸭以人工接种DHAV-1的方式建立了 DVH模型,采用饮水给药的方式对感染雏鸭予以HRS治疗,观察雏鸭血浆和肝组织中SOD、CAT和GPX活性以及MDA含量、肝组织ATP含量、线粒体超微结构变化、线粒体中SOD和GPX活性以及MDA含量的变化。结果:HRS显着地提高被感染雏鸭血浆和肝组织中SOD、CAT和GPX活性,显着地降低MDA含量;同时,显着地提高肝组织中的ATP含量以及肝组织线粒体内的SOD和GPX活性,显着降低肝组织线粒体中MDA含量,并缓解肝组织线粒体超微结构损伤。表明:DHAV-1感染引起了机体、肝组织和线粒体严重的氧化损伤,扰乱了线粒体功能,破坏了线粒体内部结构;而HRS则可能通过其抗氧化活性,提高血浆、肝组织以及线粒体中抗氧化酶活性,降低MDA的产生,减轻机体、肝组织和线粒体中氧化应激,从而发挥保肝抗损伤作用。试验Ⅴ:桧木醇干预验证HRS抗DHAV-1感染雏鸭氧化损伤的作用研究 为进一步验证HRS对DVH的治疗作用的发挥依赖于其抗氧化活性,通过人工接毒的方式建立了雏鸭的DVH模型,用HRS对患病雏鸭进行治疗,同时肌肉注射80 mg/kg桧木醇的肌肉注射剂量作为体内促氧化对HRS的治疗过程进行干预。测定各组雏鸭肝组织中SOD、CAT、GPX活性和MDA含量,以及肝脏病变积分和死亡率。结果:桧木醇干预后,HRS治疗组雏鸭肝组织中的SOD、CAT、GPX活性均显着下降,MDA含量显着升高,同时,病变积分和死亡率均也出现了显着性升高。表明:促氧化干预剂桧木醇显着地降低了 HRS在DVH治疗过程中的抗氧化作用,从而显着地影响了其治疗效果。结论:HRS对DVH的治疗效果与其抗氧化作用直接相关。试验Ⅵ:基于Nrf2/ARE信号通路探究HRS抗DHAV-1感染所致氧化损伤的分子调控机制 为探究HRS抗DHAV-1感染引起氧化损伤的可能的分子调控机制,通过体外试验,运用qRT-PCR法检侧HRS对DHAV-1感染的DEHs中SOD-1、CAT、GPX-1和Nrf2基因的mRNA表达量的影响,同时运用Western Blot技术检测HRS对DHAV-1感染DEHs中SOD-1、CAT、GPX-1、总Nrf2蛋白和核内Nrf2蛋白表达量的影响;并采用Nrf2特异性抑制剂ML385预处理DHAV-1感染的DEHs对Nrf2/ARE信号通路进行干预,运用qRT-PCR法检测ML385预处理后HRS对DHAV-1感染的DEHs中SOD-1、CAT、GPX-1和Nrf2基因的mRNA表达量的影响,同时运用Western Blot技术检测HRS对DHAV-1感染DEHs中SOD-1、CAT、GPX-1、总Nrf2蛋白和核内Nrf2蛋白表达量的影响,结果:DHAV-1感染显着地降低了 DEHs中SOD-1、CAT、GPX-1和Nrf2基因的mRNA和蛋白表达量,同时被感染的DEHs经过HRS处理后,其细胞中的上述基因的mRNA和蛋白表达量均得到显着上调;ML385干预可以显着地降低由HRS处理所引起的被感染DEHs中的SOD-1、CAT、GPX-1和Nrf2基因的mRNA和蛋白表达水平的上调作用。这些结果表明:HRS抗DHAV-1引起的氧化应激的分子机制是通过Nrf2/ARE信号通路实现的。
钱立[8]（2018）在《枸杞多糖对雄性小鼠生殖系统的保护作用机制的研究》文中提出随着社会的快速发展以及工作压力及生活负担加重,男性生殖障碍患者人群逐年增加。其精液中精子密度和精子质量存在普遍下降的趋势,不健康及畸形精子所占比例增加。雄性生殖过程完成的前提是健康完备的生精、无阻碍的精子转运以及附属性腺正常行使功能等。雄性生殖系统的功能受到细胞和内分泌系统功能地严格控制,对营养需求、环境条件、激素水平等都有精密的要求。精子发生过程受损和精子功能损伤是男性生殖系统障碍的主要表现特征。枸杞作为一种历史悠久的药用植物,其化学及营养成分多样,包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪酸、甾醇、维生素、色素类、生物碱类等。研究显示,枸杞多糖具有免疫调节、抗辐射、抗肿瘤、降低糖尿病患者血糖、增强造血功能、改善骨质疏松、预防脂肪肝、防衰老、神经调节、抗氧化及生殖保护等功能。有关枸杞多糖的制备提纯、理化性质鉴定、药理作用及临床应用都已有较为深厚的研究基础,枸杞多糖也在近年来展示出良好的应用价值。目前,关于枸杞多糖对动物免疫、调节血压、抗肿瘤、抗氧化损伤等方面研究较多,但枸杞多糖对人和动物生殖方面的研究较少。本论文主要从枸杞多糖对小鼠生殖方面的影响入手,深入挖掘枸杞多糖对不同因素造成的小鼠生殖障碍的干预作用进行探究,并通过初步的实验阐述枸杞多糖对生殖障碍的干预机制。首先,本研究探讨了LBP对环磷酰胺介导的雄性小鼠生殖器官损伤、精子质量下降的保护作用。将小鼠设置为对照组、CP模型组、以及LBP处理组进行饲养。在分别给药7天及14天后处死小鼠并称重,迅速剥离出小鼠的睾丸和附睾组织进行质量称重以计算脏器指数。随后,分离睾丸组织制备精子悬液和睾丸组织匀浆液,分别进行精子质量与氧化应激指标的检测。取出部分睾丸组织进行组织RNA的抽提和第一链cDNA合成,并利用RT-qPCR和蛋白电泳及免疫印迹的方法对细胞凋亡过程中Bax、Bcl-2、FasL、Caspase-3进行定量检测。研究结果显示CP处理显着降低雄性小鼠附睾和睾丸的脏器指数、精子质量和血液中睾酮浓度,并加剧小鼠睾丸组织的氧化应激损伤及细胞凋亡,造成细胞凋亡相关基因mRNA水平及蛋白水平的变化。加入LBP处理可以有效的将相关指标维持在正常水平附近,显着优于环磷酰胺处理组。随后本研究探讨了不同剂量的LBP对CP介导的睾丸氧化应激损伤及细胞凋亡的保护作用。将小鼠设置为对照组、环磷酰胺模型组、以及LBP处理组（梯度浓度）进行饲养。在给药7天后处死小鼠,分离睾丸组织制备睾丸组织匀浆液进行SOD、GSH-Px活性及MDA含量的测定。同时对睾丸组织组织凋亡相关基因进行RT-qPCR定量检测。酶活性及定量PCR实验表明CP处理显着降低雄性小鼠睾丸的SOD、GSH-Px活性及MDA含量,而LBP处理可以回复SOD、GSH-Px活性及MDA含量,且LBP浓度越高,对相关指标的干预越大。环磷酰胺处理可降低Bcl-2的表达并上调促凋亡基因Bax、FasL及Caspase-3的表达,加入一定浓度的LBP后可以使细胞凋亡相关基因的表达水平恢复到对照组水平,说明LBP对环磷酰胺介导致雄性小鼠氧化应激损伤及细胞凋亡的保护作用具有剂量依赖性。为了探究枸杞多糖对高温导致的小鼠生殖障碍的保护作用,将小鼠设置为对照组、高温模型组、以及LBP处理组（梯度浓度）进行饲养。在给药14天后处死小鼠并对小鼠阴囊进行高温水浴处理以建立高温应激小鼠模型。分离小鼠睾丸组织进行精子质量检测,SOD活性、MDA含量测定、细胞凋亡相关基因检测以及睾丸和附睾的脏器指数的测定。和对照组相比,高温模型小鼠的精子质量、SOD活性、脏器指数显着降低;高温处理会诱导生精细胞凋亡,并促进机体MDA累积。和高温处理组相比,加入枸杞多糖处理的小鼠其相关指标更加优异,证明。LBP对高温应激小鼠的生殖器官及氧化应激损伤及生精细胞凋亡具有一定的保护作用。最后,本研究探讨了LBP对慢性心理应激小鼠生殖障碍的保护作用。将小鼠设置为对照组、心理应激组、20%LBP、20%LBP+应激、60%LBP、60%LBP+应激进行饲养。处死小鼠并进行脏器指数测定、精子质量测定、血清睾酮、SOD酶活性及MDA含量的测定。和对照组相比,心理应激小鼠的脏器指数、精子质量、睾酮浓度和SOD酶活性显着降低,MDA沉积显着升高。而灌胃枸杞多糖的应激小鼠的相关数据相较应激小鼠有显着提升。
熊文[9]（2018）在《磷酸化修饰增强淫羊藿苷缓解DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞损伤作用及其机制研究》文中研究说明淫羊藿（Epimedium davidii Franch）为我国传统的补益中草药,具有“益精气,坚筋骨,补腰膝,强心力”之功效。随着近年来对其药理学功能研究的日益深入,人们发现淫羊藿苷（Icariin,ICA）为淫羊藿的主要药理有效成分。诸多临床和实验药理研究表明,ICA具有抗病毒、抗氧化、免疫增强等效果。然而,由于黄酮类成分水溶性较差,在实际临床应用时经常会造成一定的不便。为了提高ICA的生物利用率,更好地发挥其抗病毒效果,便于在临床推广应用,通过混合磷酸盐法成功的对ICA进行了磷酸化修饰,得到磷酸化淫羊藿苷（phosphated Icariin,pICA）。在本项目组前期的试验中,我们发现感染1型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis A virus,DHAV-1）可以导致雏鸭发生严重的肝损伤,且这种肝损伤与其体内严重的氧化应激存在显着的相关性,这说明DHAV-1感染雏鸭引起的炎症损伤与氧化应激损伤有着密切联系,当引入ICA与pICA治疗之后,雏鸭体内炎症因子水平显着下降、抗氧化酶活性明显提升,最终存活率得到显着提升,表现出良好的治疗效果,这种疗效可能与ICA与pICA的抗炎症作用及抗氧化应激作用有关。但上述研究仅局限于整体动物水平,其中的分子机制仍不清楚。因此,为了更深入的探究ICA与pICA的抗DHAV-1机理,验证之前在体内试验中的猜测,本文在体外鸭胚肝细胞（Duck embryonic hepatocytes,DEHs）上研究了 ICA与pICA对DHAV-1引起的炎症反应、氧化应激、线粒体损伤、细胞凋亡及细胞增殖的影响。本试验分为以下六个部分:试验Ⅰ ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs炎症反应作用的研究本试验旨在研究DHAV-1诱导DEHs产生炎症反应的机制及ICA和pICA的缓解作用。首先采用ELISA和q-PCR检测了感染DHAV-1及加入ICA和pICA处理后DEHs的炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量及其基因mRNA表达水平,之后用q-PCR和WB法检测了受炎症反应影响的NF-κB途径中的关键调控节点如TLR家族关键因子（TLR 2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、Myd88）的基因 mRNA 表达水平及对 TLR2、TLR 4、Myd88及NF-κB p65蛋白表达水平的影响。结果显示感染DHAV-1后DEHs分泌的IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显着升高,相关基因mRNA表达结果亦证实了这一现象,同时 TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、Myd88 基因 mRNA 表达及 TLR 2、TLR4、Myd88蛋白表达亦显着增强,促进了 NF-κBp65蛋白磷酸化。而加入ICA和pICA后则显着降低了炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量及基因mRNA表达,降低了 TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR 7、Myd88 基因 mRNA 表达及 TLR 2、TLR 4、Myd88蛋白表达同时抑制了 NF-κB p65蛋白磷酸化。说明DHAV-1可以通过TLR从Myd88依赖型和非Myd88依赖型两种途径激活NF-κB通路,最终引起细胞的炎症反应。ICA与pICA则可以降低上述指标,通过降低机体炎症程度来起到治疗作用。同时相比较于ICA,pICA更能缓解炎症反应。试验Ⅱ ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs氧化应激作用的研究本试验旨在研究ICA与pICA对DHAV-1诱导DEHs发生氧化应激的缓解效果。首先通过ELISA检测了感染DHAV-1及加入ICA和pICA处理后DEHs的氧化应激相关指标SOD、MDA、CAT、GSH和GSH-Px,之后通过加入H2O2这一促氧化剂（分为先加入DHAV-1后加入H2O2和先加入H2O2后加入DHAV-1两种方式）来反向干预验证ICA与pICA的抗氧化作用,最后用Reed-Muench法检测了 H2O2干预前和干预后,ICA与pICA对病毒本身毒力有无影响。试验结果显示,DHAV-1处理后DEHs的MDA含量显着上升而SOD、CAT、GSH、GSH-Px活性显着下降,ICA与pICA则可以降低DEHs的MDA含量,增加SOD、CAT、GSH、GSH-Px活性。在两种不同顺序干预方式中,加入H2O2后的干预实验组抗病毒效果均低于未加入H2O2干预的对照组,同时干预前后,ICA与pICA组病毒TCID50均小于VC组,而H2O2干预后的各组TCID50又一一大于干预前各组TCID50。本章试验说明ICA与pICA在体外可以通过降低MDA含量、提高相关抗氧化酶活性来起到抗氧化作用,而H2O2的干预试验反向证明了在体外ICA与pICA的抗氧化作用对于抗DHAV-1来说是必需的,此外,相比于ICA,pICA更能显着提高SOD与GSH-Px等抗氧化酶的酶活性。试验Ⅲ ICA与pICA对DHAV-1诱导的DEHs氧化应激的调控机制本试验旨在研究ICA与pICA缓解DHAV-1在体外造成DEHs氧化应激的具体调控机制。首先用WB法检测了感染DHAV-1及加入ICA和pICA处理后DEHs的SOD和GSH-Px的蛋白表达,之后用q-PCR法检测了抗氧化应激相关因子Nrf2、NQO1、HO-1、GST、GCLC和GCLM基因mRNA表达,最后用WB法检测了 MAPKs信号通路相关ERK1/2、JNK、p38蛋白表达。试验结果显示,pICA的SOD与GSH-Px蛋白丰度显着高于 ICA,而感染 DHAV-1 的 DEHs 中 Nrf2、NQO1、HO-1、GST、GCLC 和GCLM基因mRNA表达均显着降低,而加入ICA与pICA后Nrf2、NQO1、HO-1、GST、GCLC和GCLM基因mRNA表达均有一定回升,其中pICA组GST和GCLC基因mRNA表达显着高于ICA组而ICA组GCLM基因mRNA表达显着高于pICA组。MAPKs信号通路相关蛋白结果显示感染DHAV-1后DEHs中ERK1/2、JNK、p38蛋白磷酸化显着升高而ICA和pICA可以显着降低ERK1/2、JNK、p38蛋白磷酸化,同时pICA组还显着低于ICA组。本章试验说明DHAV-1可以显着降低Nrf2基因mRNA表达从而抑制下游NQO1、GST、HO-1、GCLC及GCLM基因mRNA表达,造成严重的氧化应激损伤,而ICA与pICA则可以通过提高上游Nrf2基因mRNA表达从而提高下游NQO1、GST、HO-1、GCLC及GCLM基因mRNA表达来起到抗氧化作用。DHAV-1还可以促进MAPKs信号通路中ERK1/2、JNK和p38的蛋白磷酸化而pICA比ICA可以更显着的抑制ERK1/2、JNK和p38的蛋白磷酸化,这说明ICA与pICA不仅可以通过提高机体抗氧化活性来抵御病毒,也有可能通过影响MAPKs介导的其他途径如炎症、细胞凋亡、细胞增殖等来起到抗病毒作用,而pICA的抗氧化性更优于ICA。试验Ⅳ ICA与pICA缓解DHAV-1诱导的DEHs线粒体损伤的作用研究本试验旨在研究DHAV-1造成DEHs线粒体损伤的机制及ICA和pICA的缓解作用。首先通过流式细胞仪检测了感染DHAV-1及加入ICA和pICA处理后DEHs的线粒体膜电势、线粒体内ROS水平及Ca2+浓度,之后检测了 COX和SDH的酶活,最后通过化学发光检测仪检测了 ATP的含量。试验结果显示DHAV-1可以显着降低线粒体膜电势,升高线粒体内ROS水平和Ca2+浓度,同时抑制COX和SDH的酶活,导致ATP含量显着下降。而加入ICA与pICA作用后,可以维持线粒体膜电势稳定,降低线粒体内ROS水平,降低Ca2+浓度,同时提高COX和SDH的酶活,维持ATP的稳定生成。这说明DHAV-1可以通过氧化应激来破坏线粒体膜通透性来改变线粒体结构,抑制线粒体呼吸链酶活性,从而降低ATP生成来起到致病作用,而ICA和pICA可以通过维持线粒体氧化呼吸链和三羧酸循环等内部功能的稳定来抵御DHAV-1对线粒体的损伤。此外,pICA对线粒体功能的保护性更优于ICA。试验Ⅴ ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs细胞凋亡作用的研究本试验旨在研究DHAV-1诱导DEHs细胞凋亡的机制及ICA和pICA的缓解作用。首先通过流式细胞仪观察感染DHAV-1及加入ICA和pICA处理后DEHs的细胞凋亡情况,之后通过q-PCR法比较了 DHAV-1、ICA和pICA对相关凋亡因子如Caspase家族（Caspase 3、Caspase 8、Caspase9）和 Bcl-2 家族（Bcl-2、Bax）基因 mRNA 表达的影响,最后通过WB法比较了 DHAV-1、ICA和pICA对Caspase 3、Caspase 8蛋白表达的影响。试验结果显示感染DHAV-1后DEHs的细胞凋亡率显着升高,同时Bcl-2基因mRNA表达显着下降,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9的基因mRNA表达显着上升,Caspase3、Caspase 8蛋白表达显着上升。加入ICA与pICA后,DEHs的细胞凋亡率显着下降,Bcl-2 基因 mRNA 表达显着上升,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9的基因mRNA表达显着下降,Caspase 3、Caspase 8蛋白表达显着下降。这说明DHAV-1可以通过上调Bax基因mRNA表达和下调Bcl-2基因mRNA表达,最终上调凋亡启动因子Caspase 8、Caspase 9和凋亡执行因子Caspase 3来促进DEHs细胞凋亡。而ICA与pICA可以通过升高Bcl-2/Bax比值来抑制线粒体孔道生成、抑制下游凋亡相关因子Caspase8、Caspase9和Caspase3来起到抑制细胞凋亡的治疗效果。此外,相比较于ICA,pICA能更好得抑制DHAV-1诱导的细胞凋亡。试验VIICA与pICA缓解DHAV-1抑制DEHs细胞增殖作用的研究本试验旨在研究DHAV-1抑制DEHs细胞增殖的机制及ICA和pICA的缓解作用。首先通过流式细胞仪观察感染DHAV-1及加入ICA和pICA处理后DEHs的细胞周期情况,之后通过q-PCR法和WB法比较了 DHAV-1、ICA和pICA对相关增殖因子CCND1和PCNA的基因mRNA表达及PCNA的蛋白表达的影响,最后通过WB法观察了对细胞增殖相关通路关键蛋白AKT和CREB的影响。试验结果显示显示感染DHAV-1后DEHs的细胞周期G0/G1期显着升高而S+G2/M期显着下降,CCND1基因mRNA和PCNA基因mRNA表达及蛋白表达显着下降,AKT及CREB蛋白磷酸化被抑制,而加入ICA和pICA后则可以降低G0/G1期比率升高S+G2/M期比率,提高CCND1和PCNA的基因mRNA表达及PCNA蛋白表达,提高AKT及CREB的蛋白磷酸化。这说明DHAV-1可以通过抑制AKT磷酸化从而抑制下游CREB蛋白磷酸化,进而影响CCND1和PCNA的表达,从而降低S+G2/M期细胞比率,使细胞周期的G1/G0期陷入阻滞并最终抑制细胞增殖。而ICA与pICA则可以通过激活AKT及使CREB磷酸化,提高CCND1和PCNA的表达,使DNA可以正常合成,从而加强细胞增殖。此外,相比于ICA,pICA能更好的拮抗DHAV-1对AKT蛋白磷酸化的抑制。最后通过Spearman相关性分析得出炎症损伤、氧化应激损伤、线粒体损伤、细胞凋亡及细胞增殖间存在强相关性,说明DHAV-1诱导的肝细胞损伤确实与这些途径有着密切联系。
秦森,张枫惠,朱自欣,刘家福,杜荣[10]（2017）在《诱导性多能干细胞条件培养基对成肌细胞氧化应激损伤的保护作用》文中进行了进一步梳理为了研究诱导性多能干细胞条件培养基对成肌细胞增殖和氧化应激的影响,试验将成肌细胞分为6组,即A组为正常培养的C2C12成肌细胞,B和C组细胞分别用25%和50%诱导性多能干细胞条件培养基代替部分原有培养基,A’、B’、C’组分别在A、B、C组的基础上添加了100μmol/L H2O2,再通过倒置生物显微镜观察了不同处理组细胞的生长和增殖情况,进一步利用酶标仪检测了细胞的过氧化氢酶（CAT）活性。结果表明:50%诱导性多能干细胞条件培养基使C2C12细胞数量明显增多,并显着提高了经H2O2处理的C2C12细胞的CAT活性。说明诱导性多能干细胞条件培养基可以促进成肌细胞的增殖,并对H2O2诱导的成肌细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。
二、氧化应激与抗氧化剂在兽医产科上的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、氧化应激与抗氧化剂在兽医产科上的研究进展（论文提纲范文）
（1）辣木叶多糖对奶牛乳腺氧化应激和乳中体细胞数的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 氧化应激 |
| 1.1.1 氧化应激的定义 |
| 1.1.2 活性氧的形成与氧化损伤 |
| 1.2 氧化应激对奶牛的危害 |
| 1.2.1 氧化应激引起奶牛免疫功能异常 |
| 1.2.2 氧化应激降低奶牛的生产性能 |
| 1.2.3 氧化应激诱发奶牛炎症 |
| 1.3 氧化应激的因素来源 |
| 1.3.1 环境因素 |
| 1.3.2 自身因素 |
| 1.3.3 管理因素 |
| 1.4 辣木 |
| 1.4.1 辣木的概述 |
| 1.4.2 辣木叶的营养成分 |
| 1.5 辣木叶的功能 |
| 1.5.1 免疫调节功能 |
| 1.5.2 抗氧化作用 |
| 1.5.3 其他功能 |
| 1.6 .辣木叶在反刍动物中的应用 |
| 1.7 植物多糖的应用概况 |
| 1.8 本研究的目的、意义及技术路线 |
| 1.8.1 研究目的与意义 |
| 1.8.2 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 辣木叶多糖对奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 |
| 2.1.1 试验试剂 |
| 2.1.2 试剂配制 |
| 2.1.3 原代奶牛乳腺上皮细胞的培养 |
| 2.1.4 建立损伤模型 |
| 2.1.5 筛选辣木叶多糖最适浓度 |
| 2.1.6 试验分组 |
| 2.1.7 细胞中ROS的检测 |
| 2.1.8 Hochest33258观察细胞损伤 |
| 2.1.9 透射电镜观察 |
| 2.1.10 细胞中氧化应激指标的检测 |
| 2.1.11 Western blot检测凋亡相关蛋白表达 |
| 2.1.12 RT-qPCR检测凋亡相关基因表达 |
| 2.2 辣木叶多糖对奶牛泌乳性能、抗氧化和免疫能力的影响 |
| 2.2.1 试验动物、设计和日粮 |
| 2.2.2 奶牛血液采集 |
| 2.2.3 牛奶样品采集与乳成分检测 |
| 2.2.4 血液抗氧化能力及血浆免疫检测 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 辣木叶多糖对奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 |
| 3.1.1 氧化损伤模型的建立 |
| 3.1.2 辣木叶多糖对细胞活力的影响 |
| 3.1.3 ROS检测 |
| 3.1.4 Hochest33258染色结果 |
| 3.1.5 细胞形态结构观察 |
| 3.1.6 细胞中氧化应激指标的检测 |
| 3.1.7 辣木叶多糖对细胞凋亡基因表达的影响 |
| 3.2 辣木叶多糖对奶牛泌乳性能的影响 |
| 3.3 辣木叶多糖对奶牛抗氧化能力的影响 |
| 3.4 辣木叶多糖对奶牛免疫的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 辣木叶多糖对奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用 |
| 4.1.1 氧化损伤模型的建立 |
| 4.1.2 辣木叶多糖浓度的筛选 |
| 4.1.3 细胞抗氧化能力的检测 |
| 4.1.4 辣木叶多糖对细胞凋亡的影响 |
| 4.1.5 细胞凋亡的相关蛋白与基因表达 |
| 4.2 辣木叶多糖对奶牛泌乳性能的影响 |
| 4.3 辣木叶多糖对奶牛抗氧化能力的影响 |
| 4.4 辣木叶多糖对奶牛免疫的影响 |
| 5 结论、创新点和展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（2）二氢杨梅素通过调节ROS/NLRP3炎症小体干预LPS诱导鸡肠损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 LPS和肠道损伤 |
| 1.1.1 LPS概述 |
| 1.1.2 LPS的结构与生物合成 |
| 1.1.3 LPS的作用机制 |
| 1.1.4 LPS-TLR4信号通路下游炎性因子 |
| 1.1.5 LPS诱导肠道损伤 |
| 1.2 ROS介导的肠道损伤和细胞凋亡 |
| 1.2.1 ROS概述 |
| 1.2.2 ROS与肠道损伤 |
| 1.2.3 ROS与细胞凋亡 |
| 1.3 NLRP3炎症小体的启动与激活 |
| 1.3.1 NLRP3炎症小体概述 |
| 1.3.2 NLRP3炎症小体的激活 |
| 1.3.3 IL-1β和IL-18 |
| 1.4 DHM的研究进展 |
| 1.4.1 DHM概述 |
| 1.4.2 DHM的理化性质 |
| 1.4.3 抗氧化作用 |
| 1.4.4 抗炎作用 |
| 1.4.5 抗肿瘤作用 |
| 1.4.6 抗代谢疾病作用 |
| 1.4.7 神经保护作用 |
| 1.4.8 抗心血管疾病作用 |
| 1.4.9 肝保护作用 |
| 1.4.10 皮肤保护作用 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要溶液配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 DHM对鸡肠损伤的保护作用 |
| 2.2.2 鸡原代肠上皮细胞的分离与培养 |
| 2.2.3 LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤模型的建立 |
| 2.2.4 LPS通过ROS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤的机制研究 |
| 2.2.5 NLRP3炎症小体参与LPS致鸡原代肠上皮细胞损伤的作用研究 |
| 2.2.6 DHM干预LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤的机制研究 |
| 2.3 数据计算及统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DHM对 LPS诱导的鸡肠损伤的干预作用 |
| 3.1.1 DHM缓解LPS诱导的肠黏膜损伤 |
| 3.1.2 DHM减弱LPS诱导肠组织ROS类物质的产生和氧化应激 |
| 3.1.3 肠组织病理学观察 |
| 3.1.4 肠组织扫描电镜观察 |
| 3.1.5 DHM维持肠组织屏障功能 |
| 3.1.6 相关基因Real-time RT-PCR扩增效果 |
| 3.1.7 DHM抵抗LPS诱导的肠组织细胞凋亡 |
| 3.1.8 DHM抑制LPS诱导的肠组织炎症反应 |
| 3.1.9 DHM抑制肠组织NLRP3炎症小体的表达和活化 |
| 3.1.10 DHM对肠组织IL-1β和IL-18含量的抑制作用 |
| 3.2 鸡原代肠上皮细胞的分离纯化 |
| 3.3 LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤模型的建立 |
| 3.4 LPS通过ROS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤机制研究 |
| 3.4.1 NAC的最适浓度筛选 |
| 3.4.2 NAC对 ROS产生的抑制作用 |
| 3.4.3 NAC对 LPS诱导鸡原代肠上皮细胞氧化应激的抑制作用 |
| 3.4.4 NAC对原代肠上皮细胞屏障功能的影响 |
| 3.4.5 NAC对原代肠上皮细胞凋亡的抑制作用 |
| 3.4.6 NAC对原代肠上皮细胞炎性因子表达的影响 |
| 3.4.7 NAC对原代肠上皮细胞NLRP3炎症小体表达和活化的影响 |
| 3.4.8 NAC对原代肠上皮细胞IL-1β、IL-18和LDH释放的影响 |
| 3.5 NLRP3炎症小体参与LPS致鸡原代肠上皮细胞损伤作用研究 |
| 3.5.1 MCC950对原代肠上皮细胞NLRP3炎症小体表达和活化的影响 |
| 3.5.2 MCC950抑制原代肠上皮细胞IL-1β、IL-18和LDH的释放 |
| 3.6 DHM干预LPS诱导的鸡原代肠上皮细胞损伤的机制研究 |
| 3.6.1 DHM最适作用浓度的筛选 |
| 3.6.2 DHM缓解原代肠上皮细胞氧化应激 |
| 3.6.3 DHM维持原代肠上皮细胞屏障功能 |
| 3.6.4 DHM抑制原代肠上皮细胞凋亡 |
| 3.6.5 DHM减缓LPS诱导的原代肠上皮细胞炎症反应 |
| 3.6.6 DHM抑制原代肠上皮细胞ROS的生成 |
| 3.6.7 DHM抑制原代肠上皮细胞NLRP3炎症小体的表达和活化 |
| 3.6.8 DHM对原代肠上皮细胞IL-1β、IL-18和LDH释放的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DHM对 LPS诱导的鸡肠损伤的干预作用 |
| 4.2 鸡原代肠上皮细胞的分离纯化 |
| 4.3 ROS/NLRP3炎症小体参与LPS诱导鸡原代肠上皮细胞损伤机制研究 |
| 4.4 DHM通过调节ROS/NLRP3炎症小体干预LPS诱导的鸡原代肠上皮细胞损伤机制研究 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（3）富硒酵母提取物对小鼠乳腺肿瘤细胞生长抑制作用及肿瘤细胞硒蛋白mRNA表达调控的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 硒及富硒酵母功能的研究 |
| 1 硒的生物学功能概述 |
| 1.1 硒与免疫 |
| 1.2 硒与糖尿病(DM) |
| 1.3 硒与重金属 |
| 1.4 硒与心血管疾病 |
| 1.5 硒与肿瘤 |
| 2 硒蛋白的生物学作用概述 |
| 2.1 硒结合谷胱甘肽过氧化物酶(GPX S) |
| 2.2 硫氧还蛋白还原酶(Txnrd R) |
| 2.3 碘化甲状腺氨酸脱碘酶系(DIO S) |
| 2.4 硒蛋白H(SeL H) |
| 2.5 硒蛋白K(SeL K) |
| 2.6 硒蛋白M(SeL M) |
| 2.7 硒蛋白15(Sep15) |
| 2.8 硒蛋白N(SeL N) |
| 2.9 硒蛋白P(SeL P) |
| 2.10 硒蛋白R(SeL R) |
| 2.11 硒蛋白S(SeL S) |
| 2.12 硒蛋白W(SeL W) |
| 3 有机硒与无机硒研究进展 |
| 4 本研究的目的意义 |
| 第二章 酿酒酵母的富硒培养和破碎方法的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌种 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 酿酒酵母不同生长时间培养液OD的值测定 |
| 2.2 酿酒酵母的富硒培养与生物量的测定 |
| 2.3 富硒酵母的破碎和破碎物硒含量的测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 SWUN5668 酿酒酵母的生长曲线 |
| 3.2 SWUN5668 酿酒酵母的最佳富硒条件 |
| 3.3 酿酒酵母的破碎 |
| 4 讨论 |
| 4.1 酿酒酵母的生长曲线与富硒条件的优化 |
| 4.2 酿酒酵母破碎条件优化 |
| 5 小结 |
| 第三章 不同含硒物对小鼠乳腺肿瘤细胞的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 乳腺肿瘤细胞系 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试验仪器 |
| 1.4 数据采集与分析 |
| 2 方法 |
| 2.1 药品母液的配置 |
| 2.2 小鼠乳腺肿瘤细胞细胞培养 |
| 2.3 小鼠乳腺肿瘤细胞OD_(450nm)的测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 亚硒酸钠对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)存活率的影响 |
| 3.2 L-SeM对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)存活率的影响 |
| 3.3 富硒酵母破碎提取物对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)存活率的影响 |
| 3.4 酿酒酵母破碎物对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)存活率的影响 |
| 3.5 L-SeMC对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)存活率的影响 |
| 3.6 L-SeC对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)存活率的影响 |
| 3.7 亚硒酸钠对小鼠乳腺肿瘤(67NR细胞系)存活率的影响 |
| 3.8 L-SeM对小鼠乳腺肿瘤(67NR细胞系)存活率的影响 |
| 3.9 富硒酵母破碎提取物对小鼠乳腺肿瘤(67NR细胞系)存活率的影响 |
| 3.10 酿酒酵母破碎物对小鼠乳腺肿瘤(67NR细胞系)存活率的影响 |
| 3.11 L-SeMC对小鼠乳腺肿瘤(67NR细胞系)存活率的影响 |
| 3.12 L-SeC对小鼠乳腺肿瘤(67NR细胞系)存活率的影响 |
| 3.13 亚硒酸钠对小鼠乳腺肿瘤(EMT6 细胞系)存活率的影响 |
| 3.14 L-SeM对小鼠乳腺肿瘤(EMT6 细胞系)存活率的影响 |
| 3.15 富硒酵母破碎提取物对小鼠乳腺肿瘤(EMT6 细胞系)存活率的影响 |
| 3.16 酿酒酵母破碎物对小鼠乳腺肿瘤(EMT6 细胞系)存活率的影响 |
| 3.17 L-SeMC对小鼠乳腺肿瘤(EMT6 细胞系)存活率的影响 |
| 3.18 L-SeC对小鼠乳腺肿瘤(EMT6 细胞系)存活率的影响 |
| 3.19 不同含硒物对不同小鼠乳腺肿瘤细胞的半数抑制浓度 |
| 4 讨论 |
| 4.1 细胞存活率在含硒物刺激下出现下降后缓慢升高的原因 |
| 4.2 不同细胞系的乳腺肿瘤细胞对亚硒酸钠敏感性不同 |
| 4.3 富硒酵母破碎提取物对小鼠乳腺肿瘤细胞的抑制作用 |
| 4.4 L-SeMC对不同小鼠乳腺肿瘤细胞系的作用差异 |
| 5 小结 |
| 第四章 不同含硒物对小鼠乳腺肿瘤细胞硒蛋白m RNA调控的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 乳腺肿瘤细胞系 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠乳腺肿瘤细胞的培养 |
| 2.2 乳腺肿瘤细胞硒蛋白m RNA表达量的检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠乳腺癌细胞在不同含硒物刺激后潜在内参基因的表达量 |
| 3.2 不同含硒物刺激对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)硒蛋白基因调控的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小鼠乳腺肿瘤细胞在不同含硒物刺激后潜在内参基因的选择 |
| 4.2 不同含硒物对不同乳腺肿瘤细胞系的体外刺激试验结果 |
| 4.3 不同含硒物对不同乳腺肿瘤细胞系硒蛋白基因转录的调控结果 |
| 4.4 小鼠乳腺肿瘤细胞硒蛋白基因的变异 |
| 5 小结 |
| 第五章 不同含硒物对小鼠乳腺肿瘤的抑制和对肝、肺、脾的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验细胞 |
| 1.2 试验小鼠 |
| 1.3 主要试验试剂 |
| 1.4 主要试验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 建立小鼠乳腺肿瘤模型(4T1 细胞系) |
| 2.2 试验设计与饲养管理 |
| 2.3 血液样本与脏器样本的采集 |
| 2.4 病理组织切片的制作与读片 |
| 2.5 图像采集 |
| 2.6 数据采集与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同含硒物灌胃小鼠对其体重生长的影响 |
| 3.2 不同含硒物灌胃小鼠对其肿瘤生长的影响 |
| 3.3 不同含硒物灌胃小鼠对其靶向器官和肿瘤组织病理变化的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 不同含硒物对小鼠体重和肿瘤生长的影响 |
| 4.2 不同含硒物灌胃小鼠后对肝脏、肾脏、脾脏的影响 |
| 4.3 富硒酵母与其他含硒物对小鼠乳腺肿瘤(4T1 细胞系)的作用 |
| 5 小结 |
| 结论与创新点 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（4）迷迭香酸对顺铂致小鼠急性肝肾损伤的保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写词中英文对照 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 药物性肝肾损伤的研究进展 |
| 1.1 药物性肝肾损伤概述 |
| 1.2 药物性肝肾损伤对人类的影响 |
| 1.3 药物性肝肾损伤对动物的影响 |
| 1.4 导致药物性肝肾损伤的常见药物 |
| 2 顺铂致急性肝肾损伤的研究进展 |
| 2.1 顺铂概述 |
| 2.2 顺铂致急性肝肾损伤的临床特征 |
| 2.3 顺铂致小鼠急性肝、肾损伤的致病机制 |
| 2.4 中草药防治顺铂所致的急性肝肾损伤的研究进展 |
| 3 迷迭香酸的研究进展 |
| 3.1 迷迭香酸的化学结构 |
| 3.2 迷迭香酸的药理学作用 |
| 4 研究目的及意义 |
| 5 试验技术路线 |
| 第二章 顺铂致小鼠急性肝肾损伤病理模型的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验药品与试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 顺铂致小鼠急性肝肾损伤病理模型的建立 |
| 2.2 小鼠体重变化与脏器系数 |
| 2.3 小鼠ALT、AST检测 |
| 2.4 小鼠BUN、CRE检测 |
| 2.5 病理切片的制备与观察 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 CP急性肝肾损伤小鼠的临床症状 |
| 3.2 CP对小鼠体重变化和脏器系数的影响 |
| 3.3 CP对小鼠肝功能指标ALT、AST的影响 |
| 3.4 CP对小鼠肾功能指标BUN、CRE的影响 |
| 3.5 CP急性肝肾损伤小鼠肝、肾组织病理学观察 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 迷迭香酸对顺铂致小鼠急性肝肾损伤的保护作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验药品与试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 试验分组与处理 |
| 2.2 临床观察与样本采集 |
| 2.3 小鼠体重变化与脏器系数 |
| 2.4 肝功能指标ALT、AST检测 |
| 2.5 肾功能指标BUN、CRE检测 |
| 2.6 病理切片的制作与观察 |
| 2.7 ELISA检测血清中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平 |
| 2.8 qRT-PCR法检测肝、肾组织中炎症细胞因子的mRNA表达 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 RA对CP急性肝肾损伤小鼠临床症状的影响 |
| 3.2 RA对CP急性肝肾损伤小鼠体重变化以及脏器系数的影响 |
| 3.3 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠肝功能指标ALT、AST的影响 |
| 3.4 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠肾功能指标BUN、CRE的影响 |
| 3.5 RA对CP急性肝肾损伤小鼠肝、肾组织病理学变化的影响 |
| 3.6 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 迷迭香酸对顺铂致小鼠急性肝肾损伤的作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 肝、肾SOD活性检测 |
| 2.2 肝、肾CAT活性检测 |
| 2.3 肝、肾GSH水平检测 |
| 2.4 肝、肾T-AOC水平检测 |
| 2.5 肝、肾MDA水平的检测 |
| 2.6 肝、肾NO水平检测 |
| 2.7 肝、肾MPO活性的检测 |
| 2.8 qRT-PCR法检测肝肾组织Nrf2 信号通路相关靶基因的mRNA表达水平 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠SOD活性的影响 |
| 3.2 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠CAT活性的影响 |
| 3.3 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠GSH水平的影响 |
| 3.4 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠T-AOC水平的影响 |
| 3.5 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠MDA水平的影响 |
| 3.6 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠NO水平的影响 |
| 3.7 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠MPO水平的影响 |
| 3.8 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠SOD、CAT、GPx mRNA表达水平的影响 |
| 3.9 RA对 CP急性肝肾损伤小鼠Nrf2 信号通路相关靶基因mRNA表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
（5）二氢杨梅素对内毒素诱导鸡肝损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 二氢杨梅素 |
| 1.1.1 二氢杨梅素的研究进展 |
| 1.1.2 二氢杨梅素的药理作用 |
| 1.1.3 二氢杨梅素在畜牧业中的研究现状 |
| 1.2 内毒素的研究概况 |
| 1.2.1 禽革兰氏阴性菌研究概述 |
| 1.2.2 内毒素的结构 |
| 1.2.3 致病机理 |
| 1.3 内毒素导致的肝损伤 |
| 1.3.1 内毒素与炎症 |
| 1.3.2 内毒素与肝损伤 |
| 1.4 目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物和药品 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.1.5 动物饲养管理 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 二氢杨梅素对内毒素诱导鸡原代肝细胞损伤的保护作用 |
| 2.2.2 二氢杨梅素对内毒素诱导雏鸡肝损伤的保护作用 |
| 2.2.3 RT-PCR法分析炎症因子m RNA的表达水平 |
| 2.2.4 数据计算及统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 二氢杨梅素对内毒素诱导鸡原代肝细胞损伤的保护作用 |
| 3.1.1 鸡原代肝细胞的形态学观察 |
| 3.1.2 内毒素诱导鸡原代肝细胞损伤模型的复制 |
| 3.1.3 不同浓度二氢杨梅素对鸡原代肝细胞活力的影响 |
| 3.1.4 二氢杨梅素干预鸡原代肝细胞损伤的有效浓度筛选 |
| 3.1.5 二氢杨梅素对鸡原代肝细胞中AST、ALT及 LDH活性的影响 |
| 3.1.6 二氢杨梅素对鸡原代肝细胞的抗氧化能力的影响 |
| 3.1.7 二氢杨梅素作用下鸡原代肝细胞中炎症因子的变化 |
| 3.2 二氢杨梅素对内毒素诱导雏鸡肝损伤的保护作用 |
| 3.2.1 内毒素诱导雏鸡肝损伤模型的复制 |
| 3.2.2 二氢杨梅素对雏鸡血清中ALT、AST和 LDH活性的影响 |
| 3.2.3 二氢杨梅素对雏鸡肝脏的抗氧化能力的影响 |
| 3.2.4 二氢杨梅素作用下雏鸡肝脏中炎症因子的变化 |
| 3.2.5 雏鸡肝脏组织的形态学观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 内毒素诱导的鸡肝损伤模型的复制 |
| 4.2 二氢杨梅素在内毒素诱导的肝损伤中发挥抗氧化作用 |
| 4.3 二氢杨梅素在内毒素诱导的肝损伤中发挥抗炎作用 |
| 4.4 二氢杨梅素对内毒素诱导肝损伤的保护作用 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（6）木犀草素对鹌鹑机体影响及其缓解无机汞致肝肾损伤作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 木犀草素(Luteolin,Lut) |
| 1.1.1 结构和理化性质 |
| 1.1.2 来源和提取 |
| 1.1.3 药理作用 |
| 1.2 汞(Mercury,Hg) |
| 1.2.1 理化性质,存在和用途 |
| 1.2.2 对环境的污染 |
| 1.2.3 人类接触途径 |
| 1.2.4 毒性作用 |
| 1.2.5 动物性食品中的Hg |
| 1.3 目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验药品 |
| 2.1.3 主要试验试剂与配制 |
| 2.1.4 试验仪器与设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 Lut对鹌鹑生长性能和肝肾功能的影响 |
| 2.2.2 HgCl_2诱导鹌鹑肝肾损伤模型的建立 |
| 2.2.3 Lut对HgCl_2致鹌鹑生长性能降低和肝肾损伤的作用 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 Lut对鹌鹑生长性能和肝肾功能的影响 |
| 3.1.1 生长性能指标变化 |
| 3.1.2 血液指标变化 |
| 3.1.3 血清生化指标变化 |
| 3.1.4 脏器指数变化 |
| 3.1.5 肝肾氧化应激相关指标变化 |
| 3.2 HgCl_2诱导鹌鹑肝肾损伤模型的建立 |
| 3.2.1 临床症状 |
| 3.2.2 体重和采食量变化 |
| 3.2.3 血液指标变化 |
| 3.2.4 血清生化指标变化 |
| 3.2.5 脏器指数变化 |
| 3.2.6 肝肾氧化应激相关指标变化 |
| 3.2.7 肝肾组织病理学变化 |
| 3.3 Lut对HgCl_2致鹌鹑生长性能降低和肝肾损伤的作用 |
| 3.3.1 临床症状 |
| 3.3.2 体重和采食量变化 |
| 3.3.3 血液指标变化 |
| 3.3.4 血清生化指标变化 |
| 3.3.5 脏器指数变化 |
| 3.3.6 肝肾氧化应激相关指标变化 |
| 3.3.7 肝肾组织病理学变化 |
| 3.3.8 肝肾相关mRNA表达变化 |
| 3.3.9 肝肾相关蛋白水平表达变化 |
| 3.3.10 肝肾Hg含量变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Lut对鹌鹑生长性能和肝肾功能的影响 |
| 4.1.1 生长性能指标变化 |
| 4.1.2 血液指标变化 |
| 4.1.3 血清生化指标变化 |
| 4.1.4 脏器指数变化 |
| 4.1.5 肝肾氧化应激相关指标变化 |
| 4.2 Lut对HgCl_2致鹌鹑生长性能降低和肝肾损伤的作用 |
| 4.2.1 血液指标变化 |
| 4.2.2 血清生化指标变化 |
| 4.2.3 肝肾氧化应激相关指标变化 |
| 4.2.4 肝肾炎症反应变化 |
| 4.2.5 肝肾细胞凋亡变化 |
| 4.2.6 肝肾Nrf2通路相关蛋白变化 |
| 4.2.7 肝肾Mrp2变化 |
| 4.3 应用前景 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（7）抗鸭Ⅰ型病毒性肝炎中药成分方“田地饮”组方的研制及其抗氧化损伤机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 1型鸭甲肝病毒和鸭病毒性肝炎的研究进展 |
| 1.1 1型鸭甲肝病毒的分类学研究 |
| 1.2 DHAV-1的病原学研究 |
| 1.3 流行病学研究 |
| 1.4 临床症状及病理变化研究 |
| 1.5 DVH的诊断方法研究 |
| 1.6 DVH的致病机理研究 |
| 1.7 DVH的防治策略 |
| 2 中兽医对DVH的辨证分析及中药治疗DVH的研究进展 |
| 3 自拟“田地饮”方剂中单味药物提取物的药理作用研究进展 |
| 3.1 田基黄提取物的药理作用研究进展 |
| 3.2 生地黄提取物的药理作用研究进展 |
| 3.3 荔枝草提取物的药理作用研究进展 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 抗鸭Ⅰ型病毒性肝炎中药成分方“田地饮”组方的研制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 受试药物 |
| 1.3 病毒 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 试验方法 |
| 1.7 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各受试药物在DEHs上的最大安全浓度 |
| 2.2 各受试药物对DHAV-1感染的DEHs活性的影响 |
| 2.3 各受试药物对DHAV-1感染的DEHs的最大保护效力 |
| 2.4 各受试药物对DHAV-1感染雏鸭病程的影响 |
| 2.5 各受试药物对DHAV-1感染雏鸭死亡率的影响 |
| 2.6 HRS治疗DVH效果验证的结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 HRS对DHAV-1在DEHs上增殖过程的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 受试药物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 病毒 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 HRS对DHAV-1吸附DEHs的影响 |
| 2.2 HRS在体外对DHAV-1复制的影响 |
| 2.3 HRS在体外对DHAV-1释放的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 HRS的体外抗氧化活性作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂及材料 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 DEHs的分离制备 |
| 1.4 检测指标与方法 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 HRS对ABTS自由基的清除率的测定结果 |
| 2.2 HRS对DPPH自由基清除率的测定结果 |
| 2.3 HRS对H_2O_2清除率的测定结果 |
| 2.4 HRS对DHAV-1感染的DEHs中抗氧化酶活性的影响 |
| 2.5 HRS对DHAV-1感染的DEHs中MDA含量的影响 |
| 2.6 HRS对DHAV-1感染的DEHs中ROS表达量的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 HRS抗DHAV-1感染雏鸭的氧化损伤的作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 受试药物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 病毒 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 试验方法 |
| 1.7 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 HRS对DHAV-1感染雏鸭血浆氧化应激评价指标的影响 |
| 2.2 HRS对DHAV-1感染雏鸭肝组织氧化应激评价指标的影响 |
| 2.3 HRS对DHAV-1感染雏鸭肝组织ATP含量的影响 |
| 2.4 HRS对DHAV-1感染雏鸭肝组织线粒体超微结构的影响 |
| 2.5 HRS对DHAV-1感染雏鸭肝组织线粒体氧化应激评价指标的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 桧木醇干预验证HRS抗DHAV-1感染雏鸭的氧化损伤的作用研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 受试药物 |
| 1.2 试验试剂 |
| 1.3 病毒 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 试验方法 |
| 1.7 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组雏鸭肝组织中氧化应激评价指标的变化 |
| 2.2 各组雏鸭肝脏病变计分统计结果 |
| 2.3 各组雏鸭最终死亡率统计结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第七章 基于Nrf2/ARE信号通路探究HRS抗DHAV-1感染所致氧化损伤的分子调控机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 受药物和主要试剂、材料 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.4 统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 HRS对DHAV-1感染的DEHs中SOD-1、CAT和GPX-1基因mRNA表达水平的影响 |
| 2.2 HRS对DHAV-1感染的DEHs中SOD-1、CAT和GPX-1蛋白表达水平的影响 |
| 2.3 HRS对DHAV-1感染的DEHs中Nrf2基因mRNA、总Nrf2蛋白和核内Nrf2蛋白表达水平的影响 |
| 2.4 ML385预处理对HRS调节Nrf2基因的mRNA、总Nrf2和核内Nrf2蛋白表达量的影响 |
| 2.5 ML385预处理对HRS调节SOD-1、CAT和GPX-1基因的mRNA表达水平的影响 |
| 2.6 ML385预处理对HRS调控SOD-1、CAT和GPX-1蛋白表达水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 攻读博士学位期间发表和完成的学术论文 |
| 致谢 |
（8）枸杞多糖对雄性小鼠生殖系统的保护作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略词、符号中英文对照表 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 枸杞生理特性及功能 |
| 1.1 枸杞的化学成分与性质 |
| 1.2 枸杞的药用价值 |
| 第二章 枸杞多糖研究进展 |
| 2.1 枸杞多糖化学性质 |
| 2.2 枸杞多糖的提取工艺 |
| 2.3 枸杞多糖药理学功能 |
| 第三章 生殖功能损伤研究进展 |
| 3.1 气候和温度 |
| 3.2 大剂量辐射 |
| 3.3 化学制剂 |
| 3.4 生活习惯 |
| 3.5 心理应激 |
| 第四章 环磷酰胺的研究现状 |
| 4.1 环磷酰胺临床应用 |
| 4.2 环磷酰胺的生物毒性 |
| 4.3 环磷酰胺生殖毒性 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 枸杞多糖对环磷酰胺介导雄性小鼠生殖障碍干预机制探讨 |
| 1 试剂材料 |
| 1.1 小鼠及枸杞 |
| 1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.3 实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 LBP的提取 |
| 2.2 实验动物分组及处理 |
| 2.3 生殖器官指数测定 |
| 2.4 小鼠精子质量测定 |
| 2.5 血清雄性激素T的测定 |
| 2.6 睾丸组织总蛋白及抗氧化指标检测 |
| 2.7 总RNA提取 |
| 2.8 cDNA的合成 |
| 2.9 实时定量PCR |
| 2.10 Western-blot检测睾丸组织中Bcl-2、Bax、FasL及 Caspase-3 蛋白的表达 |
| 2.11 数据统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 LBP对 CP处理的雄性小鼠睾丸、附睾脏器指数的影响 |
| 3.2 LBP对 CP处理的雄性小鼠精子质量的影响 |
| 3.3 LBP对雄性小鼠血清中睾酮含量的影响 |
| 3.4 LBP对雄性小鼠睾丸组织氧化应激指标(SOD、GSH-Px和 MDA)的影响 |
| 3.5 LBP对雄性小鼠睾丸组织凋亡基因(Bcl-2、Bax、FasL及 Caspase-3)m RNA水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 第二章 环磷酰胺介导的睾丸氧化应激损伤及细胞凋亡与枸杞多糖干预剂量相关性研究 |
| 1 试剂材料 |
| 1.1 小鼠 |
| 1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.3 实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组及处理 |
| 2.2 氧化应激指标检测 |
| 2.3 总RNA提取及c DNA合成 |
| 2.4 实时定量PCR |
| 2.5 数据统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 环磷酰胺介导的睾丸氧化应激损伤与枸杞多糖干预剂量的相关性 |
| 3.2 环磷酰胺介导的细胞凋亡与枸杞多糖干预剂量的相关性 |
| 4 讨论 |
| 第三章 枸杞多糖对高温致雄性小鼠生殖系统损伤的保护机制的探讨 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 材料及试剂 |
| 1.2 实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物处理及大鼠生殖系统损伤模型构建 |
| 2.2 睾丸及附睾脏器系数测定 |
| 2.3 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定、丙二醛(MDA)含量测定 |
| 2.4 精子总数测定 |
| 2.5 精子移动率的测定 |
| 2.6 精子畸形率测定 |
| 2.7 总RNA提取及c DNA合成 |
| 2.8 实时定量PCR |
| 2.9 数据统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 睾丸及附睾脏器系数测定 |
| 3.2 LBP对高温处理的雄性小鼠精子质量的影响 |
| 3.3 LBP对雄性小鼠血清中睾酮含量的影响 |
| 3.4 高温处理小鼠睾丸组织中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的测定 |
| 3.5 LBP对雄性小鼠睾丸组织凋亡基因Bcl-2、Bax、FasL及 Caspase-3 mRNA水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 第四章 枸杞多糖对慢性心理应激雄性小鼠生殖功能的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 材料及试剂 |
| 1.2 实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物处理 |
| 2.2 睾丸、附睾脏器重量的测定 |
| 2.3 精子质量检测 |
| 2.4 睾酮(T)含量的测定 |
| 2.5 数据统计 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 慢性心理应激小鼠睾丸、附睾脏器重量的测定 |
| 3.2 慢性心理应激雄性小鼠精子质量检测 |
| 3.3 慢性心理应激雄性小鼠中睾酮(T)水平的定量检测 |
| 3.4 慢性心理应激雄性小鼠睾丸SOD活性及MDA含量定量检测 |
| 4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
（9）磷酸化修饰增强淫羊藿苷缓解DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞损伤作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 绪论 |
| 文献综述 |
| 第一章 1型鸭肝炎病毒研究进展 |
| 1 DHAV的分类及其导致的鸭病毒性肝炎流行病学和临床症状 |
| 1.1 DHAV的分类 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 临床症状 |
| 1.4 致病机理 |
| 2 诊断方法 |
| 2.1 中和实验 |
| 2.2 电镜检测 |
| 2.3 酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) |
| 2.4 分子生物学诊断 |
| 2.5 其他诊断方法 |
| 3 防治措施 |
| 3.1 预防手段 |
| 3.2 治疗措施 |
| 参考文献 |
| 第二章 淫羊藿苷和化学修饰的研究进展及其抗DHAV-1的前期研究 |
| 1 淫羊藿苷的研究进展 |
| 1.1 淫羊藿的分布及主要活性成分 |
| 1.2 ICA的药理作用 |
| 1.3 ICA在兽医方面的应用 |
| 2 化学修饰的研究进展 |
| 3 ICA与其化学修饰产物抗DHAV-1的前期研究 |
| 3.1 ICA的磷酸化修饰 |
| 3.2 ICA与pICA抗DHAV-1所致雏鸭肝损伤研究 |
| 3.3 ICA和pICA抗DHAV-1造成的雏鸭氧化应激作用 |
| 3.4 ICA和pICA抗DHAV-1感染鸭胚肝细胞及增殖的作用 |
| 3.5 ICA和pICA免疫增强作用研究 |
| 3.6 ICA与pICA抗DHAV-1感染雏鸭的前期研究总结 |
| 4 本试验研究目的 |
| 参考文献 |
| 试验研究 |
| 第三章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs炎症反应作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 鸭胚肝细胞(Duck embryonic hepatocytes,DEHs)的制备 |
| 1.5 ICA与pICA对DEHs分泌炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的影响 |
| 1.6 ICA与pICA对炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因mRNA表达的影响 |
| 1.7 ICA与pICA对TLR家族相关因子基因mRNA表达的影响 |
| 1.8 ICA与pICA对TLR家族及NF-κB相关蛋白表达的影响 |
| 1.9 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 ICA与pICA对DEHs分泌炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的影响 |
| 2.2 ICA与pICA对炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因mRNA表达的影响 |
| 2.3 ICA与pICA对TLR家族相关因子基因mRNA表达的影响 |
| 2.4 ICA与pICA对TLR家族及NF-κB相关蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs氧化应激作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 DEHs的制备 |
| 1.5 ICA与pICA对DHAV-1感染鸭胚肝细胞氧化应激相关指标的影响 |
| 1.6 H_2O_2致DEHs氧化损伤的有效浓度筛选 |
| 1.7 ICA与pICA对H_2O_2诱导的氧化损伤DEHs抗DHAV-1感染的能力的影响 |
| 1.8 H_2O_2诱导的氧化损伤对DHAV-1感染鸭胚肝细胞毒力的影响 |
| 1.9 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 ICA与pICA对DHAV-1感染鸭胚肝细胞氧化应激相关指标的影响 |
| 2.2 H_2O_2诱导DEHs氧化损伤有效浓度筛选结果 |
| 2.3 ICA与pICA对H_2O_2诱导的氧化损伤DEHs抗DHAV-1感染的能力的影响 |
| 2.4 H_2O_2诱导的氧化损伤对DHAV-1感染鸭胚肝细胞毒力的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 ICA与pICA对DHAV-1诱导的DEHs氧化应激的调控机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 DEHs的制备 |
| 1.5 ICA与pICA对DEHs中SOD、GSH-Px蛋白表达的影响 |
| 1.6 ICA与pICA对抗氧化相关基因mRNA表达的影响 |
| 1.7 ICA与pICA对MAPKs信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 1.8 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 ICA与pICA对DEHs中SOD和GSH-Px蛋白表达的影响 |
| 2.2 ICA与pICA对抗氧化相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.3 ICA与pICA对MAPKs信号通路相关蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导的DEHs线粒体损伤作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 DEHs的制备 |
| 1.5 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体膜电位的影响 |
| 1.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体内ROS的影响 |
| 1.7 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响 |
| 1.8 ICA与pICA对鸭胚肝细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响 |
| 1.9 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内ATP含量的影响 |
| 1.10 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内Ca~(2+)浓度的影响 |
| 1.11 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体膜电位的影响 |
| 2.2 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体内ROS水平的影响 |
| 2.3 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响 |
| 2.4 ICA与pICA对鸭胚肝细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响 |
| 2.5 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内ATP含量的影响 |
| 2.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内Ca~(2+)浓度的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第七章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs细胞凋亡作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 DEHs的制备 |
| 1.5 ICA与pICA对DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞凋亡的影响 |
| 1.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 1.7 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 1.8 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 ICA与pICA对DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞凋亡的影响 |
| 2.2 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关基因表达的影响 |
| 2.3 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第八章 ICA与pICA缓解DHAV-1抑制DEHs细胞增殖作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验药物 |
| 1.2 主要试剂及材料 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 DEHs的制备 |
| 1.5 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞周期的影响 |
| 1.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞增殖相关基因表达的影响 |
| 1.7 ICA与pICA对鸭胚肝细胞PCNA蛋白表达的影响 |
| 1.8 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞增殖相关通路蛋白表达的影响 |
| 1.9 炎症损伤、氧化应激损伤、线粒体损伤、细胞凋亡及细胞增殖评价指标间相关性分析 |
| 1.10 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞周期的影响 |
| 2.2 ICA与pICA对鸭胚肝细胞增殖相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.3 ICA与pICA对鸭胚肝细胞PCNA蛋白表达的影响 |
| 2.4 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞增殖相关通路蛋白表达的影响 |
| 2.5 炎症损伤、氧化应激损伤、线粒体损伤、细胞凋亡及细胞增殖评价指标间相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（10）诱导性多能干细胞条件培养基对成肌细胞氧化应激损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞的培养和分组 |
| 2.2 细胞的观察、收集和CAT的测定 |
| 2.3 数据的统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 诱导性多能干细胞条件培养基对氧化应激状态下成肌细胞生长的影响 |
| 3.2 诱导性多能干细胞条件培养基对氧化应激状态下成肌细胞CAT活性的影响 |
| 4 讨论 |
四、氧化应激与抗氧化剂在兽医产科上的研究进展（论文参考文献）
- [1]辣木叶多糖对奶牛乳腺氧化应激和乳中体细胞数的影响[D]. 马广明. 东北农业大学, 2021
- [2]二氢杨梅素通过调节ROS/NLRP3炎症小体干预LPS诱导鸡肠损伤的机制研究[D]. 常轶聪. 东北农业大学, 2021
- [3]富硒酵母提取物对小鼠乳腺肿瘤细胞生长抑制作用及肿瘤细胞硒蛋白mRNA表达调控的研究[D]. 万浩宏. 西南民族大学, 2021
- [4]迷迭香酸对顺铂致小鼠急性肝肾损伤的保护作用及其机制研究[D]. 纪敏. 广西大学, 2020
- [5]二氢杨梅素对内毒素诱导鸡肝损伤的保护作用研究[D]. 郝蓓莉. 东北农业大学, 2020(04)
- [6]木犀草素对鹌鹑机体影响及其缓解无机汞致肝肾损伤作用[D]. 谭斅. 东北农业大学, 2020(04)
- [7]抗鸭Ⅰ型病毒性肝炎中药成分方“田地饮”组方的研制及其抗氧化损伤机制研究[D]. 杜红旭. 南京农业大学, 2019
- [8]枸杞多糖对雄性小鼠生殖系统的保护作用机制的研究[D]. 钱立. 甘肃农业大学, 2018(02)
- [9]磷酸化修饰增强淫羊藿苷缓解DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞损伤作用及其机制研究[D]. 熊文. 南京农业大学, 2018(07)
- [10]诱导性多能干细胞条件培养基对成肌细胞氧化应激损伤的保护作用[J]. 秦森,张枫惠,朱自欣,刘家福,杜荣. 黑龙江畜牧兽医, 2017(21)